ما هي فعالية فحوصات RT-PCR للكشف عن فيروس SARS-CoV-2 في الحيوانات المنوية البشرية؟

ما هي فعالية فحوصات RT-PCR للكشف عن فيروس SARS-CoV-2 في الحيوانات المنوية البشرية؟

سلط تفشي وباء فيروس كورونا 2 (SARS-CoV-2) المسبب لمتلازمة الجهاز التنفسي الحادة الوخيمة الضوء على المخاوف المتعلقة بعينات السائل المنوي لاستخدامها في البنوك المبردة.

Studie: Validierung eines SARS-CoV-2 RT-PCR-Assays: eine Voraussetzung zur Bewertung der Viruskontamination in menschlichem Sperma. Bildnachweis: Leonidovich/Shutterstock

يستخدم SARS-CoV-2 مستقبل الإنزيم المحول للأنجيوتنسين 2 (ACE2) والعوامل المساعدة الخلوية مثل TMPRSS2 لدخول الخلايا المستهدفة. قد يؤدي تفير الدم العابر أثناء عدوى SARS-CoV-2 والتعبير عن TMPRSS2 وACE2 في الخصية والغدد الملحقة الأخرى إلى إفراز SARS-CoV-2 في الجهاز التناسلي الذكري.

خلفية

على الرغم من أن تكاثر SARS-CoV-2 لا يحدث عادةً في الجهاز التناسلي الذكري، إلا أن بعض الخلايا الذكورية المحددة يمكن أن تعمل كمستودع فيروسي بعد الإصابة الجهازية بـ SARS-CoV-2.

بالإضافة إلى ذلك، يمكن أن يحدث تلوث عينات البذور بفيروس SARS-CoV-2 أثناء جمع السائل المنوي. يعد احتمال وجود SARS-CoV-2 في عينات السائل المنوي المحفوظة بالتبريد مصدر قلق للمرضى الذين يخضعون لتكنولوجيا الإنجاب المساعدة (ART) وعلاج الحفاظ على الخصوبة.

حتى الآن، اقترحت أربع دراسات وجود جينوم SARS-CoV-2 في عينات السائل المنوي. استخدمت ثلاث من هذه الدراسات فحوصات تفاعل البلمرة المتسلسل العكسي التجاري (RT-PCR) لتقييم عينات السائل المنوي، في حين لم تصف واحدة آلية اكتشاف الفيروس.

ومع ذلك، شملت هذه الدراسات عددًا صغيرًا من السكان ولم تتضمن طريقة معتمدة للكشف عن SARS-CoV-2 في عينات السائل المنوي. بالإضافة إلى ذلك، استخدمت معظم الدراسات فحوصات RT-PCR التجارية المعتمدة فقط لعينات الجهاز التنفسي واستهدفت اثنين أو ثلاثة جينات فيروسية فقط.

استخدمت ثلاث دراسات تفاعل البوليميراز المتسلسل (dd-PCR) الرقمي للكشف الجيد عن جينوم SARS-CoV-2. ومع ذلك، فإن نوع العينة المستخدمة في هذه الطريقة لم يكن عادة بذورًا. مطلوب تأكيد حد الكشف (LOD) لعينات السائل المنوي في مثل هذه الدراسات.

واستخدمت دراسة أخرى "اختبار SpermCOVID" للكشف عن جينوم SARS-CoV-2 في عينات الجهاز التنفسي ولكن ليس في عينات السائل المنوي.

دراسة جديدة في الطب الحيوي الإنجابي على الإنترنت كان الهدف من المجلة هو تطوير بروتوكول موحد للكشف عن الحمض النووي الريبوزي SARS-CoV-2 في أجزاء السائل المنوي المستخدمة في العلاج المضاد للفيروسات القهقرية. كان هذا اختبار RT-PCR عالي الأداء يستخدم عينات من الحيوانات المنوية والسائل المنوي المحفوظ بالتبريد للكشف عن الحمض النووي الريبي (RNA) لـ SARS-CoV-2. بالإضافة إلى ذلك، تم تحديد فعالية الطريقة أيضًا بناءً على خصائص البذور المختلفة.

حول الدراسة

وتضمنت الدراسة جمع عينات السائل المنوي من المرضى الذين خضعوا لتحليل السائل المنوي الروتيني للعقم بين يوليو 2020 ومارس 2021، بغض النظر عن المعايير السريرية أو مؤشر كتلة الجسم أو العمر. ولم يبلغ أي من المرضى عن إصابته بالحمى أو أعراض أخرى لـ SARS-CoV-2. وأفادوا أيضًا أنهم لم يخالطوا أي شخص يعاني من أعراض SARS-CoV-2. تم بعد ذلك إجراء تحليل السائل المنوي التقليدي، والكشف عن كريات الدم البيضاء وتقييم شكلها، يليه إعداد العينة.

تم إذابة العينات السوية النطاف عند درجة حرارة 4 درجات مئوية وتم تجميعها للاختبار التحليلي. وتم إجراء استخراج الحمض النووي الريبي (RNA) من 160 ميكرولتر من كل عينة، يليه تضخيم جينوم SARS-CoV-2 والتحقق التحليلي من مقايسة SARS-CoV-2 RT-PCR. تم تحليل تأثير جودة الحيوانات المنوية على أساس فعالية RT-PCR. أخيرًا، تم إجراء اختبارات الدقة بالإضافة إلى LOD وحدود القياس الكمي (LOQ) لفحص SARS-CoV-2 RT-PCR.

نتائج

وأظهرت النتائج أن اختبارات الدقة استوفت المتطلبات المتوقعة لأنواع البذور ذات التركيز العالي لـ SARS-CoV-2 RNA، ولأهداف فيروسات N وORF1ab، ولأنواع البذور ذات تركيز SARS-CoV-2 RNA المنخفض. بالإضافة إلى ذلك، تم الإبلاغ عن أن الجين S كان الهدف الفيروسي الأقل حساسية في الاختبار، بينما كان الجين N هو الهدف الأكثر حساسية.

وقد لوحظ أن الوسائط الواقية من البرد وخصائص البذور ليس لها أي تأثير على فعالية طريقة الكشف. تم الإبلاغ عن LOD على أنه 0.33 نسخة من جينوم SARS-CoV-2 / عينة ميكرولتر للسائل المنوي و 0.23 نسخة جينوم SARS-CoV-2 / ميكرولتر للحيوانات المنوية. وأخيرا، ينبغي أن يكون LOQ نسخة واحدة من الجينوم الفيروسي / ميكرولتر من العينة.

لذلك، يمكن لهذه الدراسة تحديد وجود الحمض النووي الريبوزي SARS-CoV-2 RNA في الحيوانات المنوية والسائل المنوي المحفوظة بالتبريد. وكانت الطريقة فعالة بغض النظر عن خصائص الحيوانات المنوية ونوع السائل المنوي. وبالتالي، يمكن لهذه الطريقة ضمان سلامة المتبرعين بالحيوانات المنوية والمرضى الذين يستفيدون من تقنيات الحفاظ على الخصوبة أثناء جائحة SARS-CoV-2.

مرجع:

• Chabrolles, H. et al. (2022). Validierung eines SARS-CoV-2 RT-PCR-Assays: eine Voraussetzung zur Bewertung der Viruskontamination in menschlichem Sperma. Reproduktionsbiomedizin online. doi: https://doi.org/10.1016/j.rbmo.2022.09.004. https://www.rbmojournal.com/article/S1472-6483(22)00684-8/fulltext#latedArticles.