Quelle est l’efficacité des tests RT-PCR pour détecter le SRAS-CoV-2 dans le sperme humain ?

Quelle est l’efficacité des tests RT-PCR pour détecter le SRAS-CoV-2 dans le sperme humain ?

L’épidémie du coronavirus 2 du syndrome respiratoire aigu sévère (SRAS-CoV-2) a mis en lumière des inquiétudes concernant les échantillons de sperme destinés à la cryobanque.

Studie: Validierung eines SARS-CoV-2 RT-PCR-Assays: eine Voraussetzung zur Bewertung der Viruskontamination in menschlichem Sperma. Bildnachweis: Leonidovich/Shutterstock

Le SRAS-CoV-2 utilise l’enzyme de conversion de l’angiotensine 2 (ACE2) du récepteur hôte et des cofacteurs cellulaires tels que TMPRSS2 pour pénétrer dans les cellules cibles. La virémie transitoire pendant l'infection par le SRAS-CoV-2 et l'expression de TMPRSS2 et ACE2 dans les testicules et d'autres glandes accessoires peuvent conduire à la sécrétion du SRAS-CoV-2 dans l'appareil reproducteur masculin.

arrière-plan

Bien que la réplication du SRAS-CoV-2 ne se produise généralement pas dans le système reproducteur masculin, certaines cellules mâles spécifiques peuvent agir comme un réservoir viral après une infection systémique par le SRAS-CoV-2.

De plus, une contamination des échantillons de graines par le SRAS-CoV-2 peut survenir lors de la collecte de sperme. La possibilité de présence du SRAS-CoV-2 dans des échantillons de sperme cryoconservés est une préoccupation pour les patients subissant une technologie de procréation médicalement assistée (ART) et un traitement de préservation de la fertilité.

À ce jour, quatre études ont suggéré la présence du génome du SRAS-CoV-2 dans des échantillons de sperme. Trois de ces études ont utilisé des tests commerciaux de réaction en chaîne par polymérase-transcription inverse (RT-PCR) pour évaluer des échantillons de sperme, tandis qu'une n'a pas décrit le mécanisme de détection du virus.

Cependant, ces études incluaient une petite population et n’incluaient pas de méthode validée pour détecter le SRAS-CoV-2 dans des échantillons de sperme. De plus, la plupart des études ont utilisé des tests RT-PCR commerciaux approuvés uniquement pour les échantillons respiratoires et ciblant uniquement deux ou trois gènes viraux.

Trois études ont utilisé la PCR numérique par gouttelettes (dd-PCR) pour une bonne détection du génome du SRAS-CoV-2. Cependant, le type d’échantillon utilisé dans cette méthode n’était généralement pas des graines. Une confirmation de la limite de détection (LOD) est requise pour les échantillons de sperme dans de telles études.

Une autre étude a utilisé un « test SpermCOVID » pour détecter le génome du SRAS-CoV-2 dans des échantillons respiratoires mais pas dans des échantillons de sperme.

Une nouvelle étude dans le Biomédecine reproductive en ligne L’objectif de la revue était de développer un protocole standardisé pour la détection de l’ARN du SRAS-CoV-2 dans les fractions de sperme utilisées pour le TAR. Il s’agissait d’un test RT-PCR haute performance utilisant des échantillons de sperme et du liquide séminal cryoconservé pour la détection de l’ARN du SRAS-CoV-2. De plus, l’efficacité de la méthode a également été déterminée en fonction des différentes caractéristiques des graines.

À propos de l'étude

L’étude consistait à collecter des échantillons de sperme de patients ayant subi une analyse de sperme de routine pour l’infertilité entre juillet 2020 et mars 2021, quels que soient les critères cliniques, l’indice de masse corporelle ou l’âge. Aucun des patients n’a signalé de fièvre ou d’autres symptômes du SRAS-CoV-2. Ils ont également déclaré qu’ils n’avaient été exposés à aucune personne présentant des symptômes du SRAS-CoV-2. Une analyse conventionnelle du sperme, une détection des leucocytes et une évaluation de la morphologie ont ensuite été effectuées, suivies d'une préparation des échantillons.

Les échantillons normozoospermiques ont été décongelés à 4°C et regroupés pour des tests analytiques. L'extraction de l'ARN a été réalisée à partir de 160 µl de chaque échantillon, suivie d'une amplification du génome du SARS-CoV-2 et d'une validation analytique du test SARS-CoV-2 RT-PCR. L'influence de la qualité du sperme basée sur l'efficacité de la RT-PCR a été analysée. Enfin, des tests de précision ainsi que la LOD et la limite de quantification (LOQ) ont été effectués pour le test SARS-CoV-2 RT-PCR.

Résultats

Les résultats ont montré que les tests de précision répondaient aux exigences attendues pour les types de semences à forte concentration d’ARN du SRAS-CoV-2, pour les cibles des virus N et ORF1ab et pour les types de semences à faible concentration d’ARN du SRAS-CoV-2. De plus, il a été rapporté que le gène S était la cible virale la moins sensible du test, tandis que le gène N était la cible la plus sensible.

Il a été observé que les milieux cryoprotecteurs et les caractéristiques des graines n’avaient aucune influence sur l’efficacité de la méthode de détection. La LOD a été rapportée comme étant de 0,33 copies du génome du SRAS-CoV-2/µL d’échantillon pour le liquide séminal et de 0,23 copies du génome du SRAS-CoV-2/µL pour les spermatozoïdes. Enfin, la LOQ doit être d’une copie du génome viral/µl de l’échantillon.

Par conséquent, cette étude pourrait déterminer la présence de l’ARN du SRAS-CoV-2 dans les spermatozoïdes et le liquide séminal cryoconservés. La méthode était efficace quelles que soient les caractéristiques et le type de sperme. Ainsi, cette méthode peut assurer la sécurité des donneurs de sperme et des patients bénéficiant de techniques de préservation de la fertilité pendant la pandémie du SRAS-CoV-2.

Référence:

• Chabrolles, H. et al. (2022). Validierung eines SARS-CoV-2 RT-PCR-Assays: eine Voraussetzung zur Bewertung der Viruskontamination in menschlichem Sperma. Reproduktionsbiomedizin online. doi: https://doi.org/10.1016/j.rbmo.2022.09.004. https://www.rbmojournal.com/article/S1472-6483(22)00684-8/fulltext#latedArticles.