Milyen hatékonyságúak az RT-PCR vizsgálatok a SARS-CoV-2 kimutatására emberi spermában?

Milyen hatékonyságúak az RT-PCR vizsgálatok a SARS-CoV-2 kimutatására emberi spermában?

A súlyos akut légúti szindróma koronavírus 2 (SARS-CoV-2) világjárvány kitörése rávilágított a kriobankolás céljára vett spermamintákkal kapcsolatos aggályokra.

Studie: Validierung eines SARS-CoV-2 RT-PCR-Assays: eine Voraussetzung zur Bewertung der Viruskontamination in menschlichem Sperma. Bildnachweis: Leonidovich/Shutterstock

A SARS-CoV-2 a gazdareceptor angiotenzin-konvertáló enzim 2-t (ACE2) és a sejtes kofaktorokat, például a TMPRSS2-t használja a célsejtekbe való bejutáshoz. A SARS-CoV-2 fertőzés során fellépő átmeneti virémia, valamint a TMPRSS2 és ACE2 expressziója a herében és más járulékos mirigyekben SARS-CoV-2 szekréciójához vezethet a férfi nemi szervekben.

háttér

Bár a SARS-CoV-2 replikációja általában nem fordul elő a férfi reproduktív rendszerben, bizonyos specifikus hímsejtek vírustárolóként működhetnek a szisztémás SARS-CoV-2 fertőzés után.

Ezenkívül a magminták SARS-CoV-2-vel való szennyeződése is előfordulhat a spermagyűjtés során. A SARS-CoV-2 lehetősége a mélyhűtött spermamintákban aggodalomra ad okot az asszisztált reprodukciós technológián (ART) és a termékenységet megőrző kezelésen áteső betegek számára.

Eddig négy tanulmány utalt a SARS-CoV-2 genom jelenlétére a spermamintákban. E tanulmányok közül három kereskedelmi reverz transzkripciós-polimeráz láncreakciót (RT-PCR) használt a spermaminták értékelésére, míg egy nem írta le a vírus kimutatásának mechanizmusát.

Ezek a vizsgálatok azonban kis populációt vontak be, és nem tartalmaztak validált módszert a SARS-CoV-2 spermamintákban történő kimutatására. Ezenkívül a legtöbb tanulmány kereskedelmi forgalomban kapható RT-PCR vizsgálatokat használt, amelyeket csak légúti mintákra hagytak jóvá, és csak két vagy három vírusgént céloztak meg.

Három tanulmány digitális csepp-PCR-t (dd-PCR) használt a SARS-CoV-2 genom jó kimutatására. Ennek a módszernek a mintája azonban általában nem mag volt. Az ilyen vizsgálatok során a spermaminták esetében a kimutatási határ (LOD) megerősítése szükséges.

Egy másik tanulmány „SpermCOVID-tesztet” használt a SARS-CoV-2 genom kimutatására légúti mintákban, az ondómintákban azonban nem.

Egy új tanulmány a Reproduktív biomedicina online A folyóirat célja egy szabványos protokoll kidolgozása volt a SARS-CoV-2 RNS kimutatására az ART-hoz használt spermafrakciókban. Ez egy nagy teljesítményű RT-PCR vizsgálat volt, amely spermamintákat és mélyhűtött ondófolyadékot használt a SARS-CoV-2 RNS kimutatására. Ezen túlmenően a különböző vetőmag-jellemzők alapján is meghatározták a módszer hatékonyságát.

A tanulmányról

A vizsgálat során spermamintákat gyűjtöttek olyan betegektől, akiknél 2020 júliusa és 2021 márciusa között rutin spermaelemzésen estek át, függetlenül a klinikai kritériumoktól, a testtömeg-indextől vagy az életkortól. Egyik beteg sem számolt be lázról vagy a SARS-CoV-2 egyéb tüneteiről. Arról is beszámoltak, hogy senkinek sem voltak kitéve SARS-CoV-2 tüneteinek. Ezt követően hagyományos spermaanalízist, leukocita kimutatást és morfológiai értékelést végeztünk, majd a minta előkészítését.

A normozoospermikus mintákat 4 °C-on felengedtük, és összegyűjtöttük analitikai vizsgálat céljából. Minden mintából 160 µl-ből RNS extrakciót végeztünk, majd a SARS-CoV-2 genom amplifikációját és a SARS-CoV-2 RT-PCR vizsgálat analitikai validálását követte. Elemeztük a spermium minőségének az RT-PCR hatékonyságán alapuló hatását. Végül a SARS-CoV-2 RT-PCR vizsgálathoz precíziós tesztelést, valamint LOD-t és mennyiségi meghatározási határt (LOQ) végeztünk.

Eredmények

Az eredmények azt mutatták, hogy a precíziós tesztek megfeleltek a magas SARS-CoV-2 RNS koncentrációjú magtípusok, az N és ORF1ab vírus célpontok, valamint az alacsony SARS-CoV-2 RNS koncentrációjú magtípusok esetében elvárt követelményeknek. Ezenkívül arról számoltak be, hogy az S gén volt a vizsgálat legkevésbé érzékeny víruscélpontja, míg az N gén a legérzékenyebb célpont.

Megállapítottam, hogy a krioprotektáns táptalaj és a mag jellemzői nem befolyásolták a kimutatási módszer hatékonyságát. A LOD-t 0,33 SARS-CoV-2 genomkópia/µl mintaként jelentették az ondófolyadékra, és 0,23 SARS-CoV-2 genomkópia/µl-ben a spermiumok esetében. Végül az LOQ-nak a minta egy vírusgenom-másolatának kell lennie.

Ezért ez a tanulmány meghatározhatja a SARS-CoV-2 RNS jelenlétét a mélyhűtött spermában és az ondófolyadékban. A módszer a sperma jellemzőitől és típusától függetlenül hatékony volt. Így ez a módszer biztosíthatja a spermadonorok és a SARS-CoV-2 világjárvány idején a termékenységmegőrzési technikák előnyeit élvező betegek biztonságát.

Referencia:

• Chabrolles, H. et al. (2022). Validierung eines SARS-CoV-2 RT-PCR-Assays: eine Voraussetzung zur Bewertung der Viruskontamination in menschlichem Sperma. Reproduktionsbiomedizin online. doi: https://doi.org/10.1016/j.rbmo.2022.09.004. https://www.rbmojournal.com/article/S1472-6483(22)00684-8/fulltext#latedArticles.