Suche
Mein Konto
Daugiaspecifiškumo ir antikūnų avidiškumo derinys padidina apsaugą nuo SARS-CoV-2
Neseniai bioRxiv* išankstinio spausdinimo serveryje paskelbtame tyrime tarptautinė tyrėjų komanda panaudojo MULTI specifinę multi-afiniteto antikūnų platformą (Multabody, MB), gautą iš žmogaus lengvosios grandinės apoferitino protomero, kad sukurtų platų ir stiprų sunkų ūminį kvėpavimo sindromą (SARS-CoV-2) koronaviruso sindromą. 2)-neutralizuojantys antikūnai (Abs). Nuolatinis susirūpinimą keliančių SARS-CoV-2 variantų (LOJ) atsiradimas kelia grėsmę gydomųjų anti-SARS-CoV-2 monokloninių antikūnų (mAb) veiksmingumui. Tyrimo autoriai anksčiau sukūrė MB platformą, kad pagerintų anti-SARS-CoV-2 ir anti-žmogaus imunodeficito viruso-1 (ŽIV-1) Abs neutralizavimo gebėjimą. Be to, jie pranešė, kad padidėjusį Ab afinitetą galima derinti su daugiaspecifiškumu (keli Ab fragmentai, atpažįstantys skirtingus epitopus), siekiant pagerinti antigeno atpažinimą. Tyrimas: antikūnų afinitetas ir daugiaspecifiškumas užtikrina...
Daugiaspecifiškumo ir antikūnų avidiškumo derinys padidina apsaugą nuo SARS-CoV-2
Neseniai paskelbtame tyrime bioRxiv * Išankstinio spausdinimo serveris: Tarptautinė tyrėjų komanda naudojo MULTI specifinę kelių afinitetų antikūnų platformą (Multabody, MB), gautą iš žmogaus lengvosios grandinės apoferitino protomero, kad sukurtų platų ir stiprų sunkų ūminį kvėpavimo sindromą (SARS-CoV-2) koronavirusą. 2)-neutralizuojantys antikūnai (Abs).
Nuolatinis susirūpinimą keliančių SARS-CoV-2 variantų (LOJ) atsiradimas kelia grėsmę gydomųjų anti-SARS-CoV-2 monokloninių antikūnų (mAb) veiksmingumui. Tyrimo autoriai anksčiau sukūrė MB platformą, kad pagerintų anti-SARS-CoV-2 ir anti-žmogaus imunodeficito viruso-1 (ŽIV-1) Abs neutralizavimo gebėjimą. Be to, jie pranešė, kad padidėjusį Ab afinitetą galima derinti su daugiaspecifiškumu (keli Ab fragmentai, atpažįstantys skirtingus epitopus), siekiant pagerinti antigeno atpažinimą.
*Svarbi PASTABA:BioRxiv skelbia preliminarias mokslines ataskaitas, kurios nėra recenzuojamos, todėl neturėtų būti laikomos įtikinamais, skirtos vadovautis klinikine praktika / su sveikata susijusiu elgesiu arba laikomos nustatyta informacija.
Apie studiją
Šiame tyrime mokslininkai ištyrė, ar sustiprintas SARS-CoV-2 neutralizavimas in vitro, apie kurį anksčiau buvo pranešta MB platformai, gali sukelti apsaugą in vivo esant mažoms dozėms. Jie taip pat ištyrė, ar MB gali atkurti neutralizavimo gebėjimo praradimą, pastebėtą naudojant įprastai naudojamus mAb prieš SARS-CoV-2 LOJ, ir išplėsti jų veikimo sritį kitiems virusams.
Trispecifinis MB buvo surinktas atomine skiriamąja geba ir ištirtas naudojant krioelektronų mikroskopijos (krio-EM) analizę. MB gebėjimas užtikrinti imuninę apsaugą in vivo buvo įvertintas sukuriant IgG kokteilį, atitinkantį MB ir apimantį IgG4 Fc mutacijas (F234A, S228P, G237A, P238S, L235A), kad būtų pašalintas prisijungimas prie Fc gama receptorių (FcgR). Buvo atlikti biologinio sluoksnio interferometrijos (BLI) ir ADCP (nuo Ab priklausomos ląstelės tarpininkaujamos fagocitozės) eksperimentai.
Žmogaus pelės, ekspresuojančios angiotenziną konvertuojantį fermentą 2 (hACE2) ir hFcRn, buvo gydomos MB ir IgG4 molekulėmis be FcgR prisijungimo ir užkrėstos į nosį SARS-CoV-2. Paimti pelių plaučių mėginiai, siekiant nustatyti plaučių viruso titrus, remiantis jų citopatiniu poveikiu (CPE) ir kiekybine atvirkštinės transkripcijos polimerazės grandininės reakcijos (qRT-PCR) analize.
Norint ištirti, ar galima dar labiau pagerinti mAb neutralizavimo potencialą, buvo išreikšti monospecifiniai MB, o jų neutralizavimo plotis ir gebėjimai buvo lyginami su atitinkamomis mAb prieš SARS-CoV-2 laukinio tipo (WT) padermę ir LOJ alfa, beta. Gama, Delta ir Omicron BA.1.
Neutralizacijos titrams nustatyti atlikti pseudoviruso (PsV) neutralizacijos testai ir sarbekoviruso neuralizacijos testai. Be to, buvo ištirti mAb 80 molekuliniai surišimo mechanizmai.
Trispecifinė 2-7-10-40-11-11 molekulinė aprėptis buvo įvertinta remiantis individualiu ir kombinuotu UBR palaidoto paviršiaus (BSA) Ab specifiškumu, parodytu jų trimatėmis (3D) struktūromis. Ląstelių kultūros eksperimentams buvo naudojamos žmogaus embriono inksto (HEK) 293T-ACE2 ląstelės ir Vero E6 ląstelės, o HEK 293F ląstelėse buvo ekspresuojami genai, koduojantys žmogaus apoferitino susiliejimą, fragmentų antigeną surišančius regionus (Fabs), fragmentų kristalizuojamas sritis (Fcs) ir IgG. Baltymų frakcijos buvo išgrynintos chromatografijos būdu ir atlikta srauto citometrijos (FC) analizė.
Rezultatai
Ab tipo molekulinės šerdys buvo vienalytės. Pagerėjus MB neutralizavimo galiai, pagerėjo imuninė apsauga in vivo, kai dozės buvo 30 kartų mažesnės nei atitinkamų IgG. MB veiksmingai neutralizavo SARS-CoV-2 variantus, išnaudodami kombinuotą avidiškumą, o keli mAb gali būti sujungti į vieną MB molekulę (su 62 kontaktinėmis liekanomis), kad būtų neutralizuojami sarbekovirusai, išskyrus SARS-CoV-2.
Apoferitino-MB karkasai buvo panašūs į žmogaus apoferitino lengvąją grandinę. Trispecifinio MB (TMB) pusė didžiausios slopinančios koncentracijos (IC50) vertė buvo 0,0002 μg/ml, o tai buvo 1000 kartų didesnė nei IgG kokteilio. IgG4 Ab kokteilis ir TMB prisijungia prie pelių ir žmogaus FcRn, bet ne su FcgR. TMB suteikė žymiai didesnę apsaugą (60 % išgyvenamumas) nei IgG4 Ab kokteilis.
Penkių mAb (80, 52, 80, 11-11, 10-40 ir 2-36) plotis buvo 100%, o IC50 riba buvo penki μg/ml. Tačiau naudojant 0,01 μg/mL IC50 ribą, tik 11–11 ir 10–40 neutralizavo du LOJ. Priešingai, naudojant kaip monospecifinius MB, trys mAb specifiškumas (2–7, 80 ir 52) pasiekė 100% neutralizacijos plotį, naudojant tą pačią ribinę vertę.
mAb 80 slopino SARS-CoV-2, užkertant kelią receptorių surišimo motyvo (RBM) sąveikai su ACE2, o sunkioji mAb grandinė ir T478 bei S477 liekanos buvo daugiausia atsakingos už šeimininko ir viruso sąveiką. Likučiai buvo mutuoti į LOJ, sumažinant Ab prisijungimą, kurį padidino MB. Taip pat mutacijos sumažino SARS-CoV-2 ir kitų sarbekovirusų LOJ neutralizavimą 2–7, 10–40 ir 11–11 mAb, įtrauktais į trispecifinę molekulę, kurią atkūrė aukštesnė BSA, apimanti MB.
Apskritai tyrimo rezultatai parodė, kad trispecifinis 2-7-10-40-11-11-MB yra plataus, tvirto ir stipraus pan-sarbekoviruso neutralizavimo koncepcijos įrodymas, nukreiptas į tris nepilnai persidengiančius funkcinius UBR epitopus ir neutralizuojantis potencijos padidėjimą per avidumo molekulę.
*Svarbi PASTABA:BioRxiv skelbia preliminarias mokslines ataskaitas, kurios nėra recenzuojamos, todėl neturėtų būti laikomos įtikinamais, skirtos vadovautis klinikine praktika / su sveikata susijusiu elgesiu arba laikomos nustatyta informacija.
Nuoroda:
- Vorläufiger wissenschaftlicher Bericht.
Die Kombination aus Antikörperavidität und Multispezifität bietet Schutz vor SARS-CoV-2 und Widerstandsfähigkeit gegen das Entweichen von Viren. Clare Burn Aschner et al. bioRxiv Preprint 2022, DOI: https://doi.org/10.1101/2022.10.23.513379, https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2022.10.23.513379v1