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Un kit compacto de detección rápida para detectar el virus de la viruela del simio muestra resultados prometedores en una nueva investigación
En un informe reciente en la revista Travel Medicine and Infectious Diseases, los investigadores presentaron un kit compacto de detección rápida que analiza los virus de la viruela del mono utilizando una combinación de amplificación de la polimerasa recombinasa (RPA) y tecnología de repeticiones palindrómicas cortas agrupadas regularmente interespaciadas (CRISPR). Aprenda: Laboratorio de bolsillo para la detección rápida del virus de la viruela simica. Fuente de la imagen: Tatiana Buzmakova/Shutterstock Antecedentes El brote de viruela simica se ha extendido mucho más allá de los países endémicos de África occidental y central en 2022, y la Organización Mundial de la Salud (OMS) lo ha declarado ahora una emergencia de salud pública de importancia internacional. El patógeno etiológico de la viruela simica es el virus de la viruela simica, que pertenece al género de los ortopoxvirus. La prueba que se utiliza actualmente para detectar la viruela simica es la...
Un kit compacto de detección rápida para detectar el virus de la viruela del simio muestra resultados prometedores en una nueva investigación
En un reportaje reciente de la revista Medicina de viaje y enfermedades infecciosas., los investigadores introdujeron un kit compacto de detección rápida que analiza los virus de la viruela del simio utilizando una combinación de amplificación de la polimerasa recombinasa (RPA) y tecnología de repeticiones palindrómicas cortas agrupadas regularmente interespaciadas (CRISPR).
Lernen: Taschenlabor zum schnellen Nachweis des Affenpockenvirus. Bildquelle: Tatiana Buzmakova/Shutterstock
fondo
El brote de viruela simica se ha extendido mucho más allá de los países endémicos de África occidental y central en 2022, y la Organización Mundial de la Salud (OMS) lo ha declarado ahora una emergencia de salud pública de importancia internacional. El patógeno etiológico de la viruela simica es el virus de la viruela simica, que pertenece al género de los ortopoxvirus.
La prueba que se utiliza actualmente para detectar la viruela simica es la prueba de reacción en cadena de la polimerasa (PCR), que amplifica el ácido desoxirribonucleico (ADN) de los ortopoxvirus o de virus específicos de la viruela simica. Sin embargo, la PCR es un proceso largo que requiere un termociclador, personal capacitado y un laboratorio.
La detección temprana y la contención de personas infectadas son esenciales para controlar un brote de enfermedad. Los inmunoensayos como las tiras de flujo lateral son más simples y rápidos que las PCR, pero tienen una mayor reactividad cruzada para los ortopoxvirus, lo que dificulta la detección precisa de la viruela simica. Por lo tanto, es fundamental contar con tecnología que detecte la viruela simica rápidamente y proporcione resultados precisos y confiables.
Mecanismo de detección
In the present study, researchers developed a rapid detection kit or pocket laboratory for testing for monkeypox virus. The detection kit uses the principles of RPA and CRISPR technology to increase the specificity and sensitivity of the analysis. RPA amplifica los genes diana del virus de la viruela del simio que son escaneados por el ácido ribonucleico (ARN) guía de CRISPR y la enzima proteína 12a (Cas12a) asociada a CRISPR.
La escisión de la secuencia mediada por CRISPR/Cas12sa se produce solo cuando se reconocen los amplicones diana de la viruela simica, eliminando así la posibilidad de señales no específicas. The cleavage results in fluorescence, indicating monkeypox-positive samples.
laboratorio de bolsillo
El kit pesaba 500 gy el estuche era impermeable y lo suficientemente compacto como para caber en una bolsa. Los componentes consistían en dos bloques calefactores impresos tridimensionalmente: el bloque A, que calienta las muestras a 80 °C para la lisis de la envoltura viral, y el bloque B, que calienta las muestras a 40 °C para la amplificación del ADN.
El kit incluía tubos que contenían enzimas liofilizadas protegidas con trehalosa y tubos de muestra que contenían solución de cloruro de sodio y acetato de magnesio. También se incluyó en el kit un tampón de rehidratación que contiene cebadores y el indicador de fluorescencia, así como una linterna ultravioleta (UV) para detectar la fluorescencia.
Durante el proceso de prueba, la muestra se coloca en el tubo de muestra y la envoltura del virus se lisa usando un bloque calentador A. La muestra calentada se agrega al tubo que contiene las enzimas liofilizadas y se agrega el tampón de rehidratación. Luego se utiliza el bloque calefactor B para reforzar la región objetivo. Finalmente, la fluorescencia se detecta con la linterna UV.
Durante la prueba experimental, los investigadores tomaron muestras pseudotipificadas del virus de la viruela del simio, el tiempo total fue de 25 minutos y se detectaron con precisión muestras que contenían sólo diez partículas de virus.
Conclusiones
En conclusión, los investigadores presentaron un novedoso kit de detección rápida que era compacto y podía usarse para detectar el virus de la viruela simica sin el uso de instrumentos complicados, técnicos capacitados o una instalación de laboratorio.
El kit de detección utiliza los principios de RPA y CRISPR para amplificar regiones objetivo del ADN de la viruela simica y escindirlas utilizando el complejo CRISPR/Cas12a, con un indicador fluorescente que señala la detección del ADN del virus de la viruela simica.
Las pruebas con el virus pseudotipado mostraron una detección rápida y exitosa del virus de la viruela simica, lo que sugiere que el kit podría usarse potencialmente para realizar pruebas rápidas a viajeros y en áreas que carecen de infraestructura médica adecuada y personal capacitado.
Referencia:
- Wei, J., Meng, X., Li, J. & Pang, B. (2022). Taschenlabor zum schnellen Nachweis des Affenpockenvirus. Reisemedizin und Infektionskrankheiten. tue ich: https://doi.org/10.1016/j.tmaid.2022.102478 https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1477893922002241?via%3Dihub
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