Un kit compact de détection rapide pour tester le virus Monkeypox montre des résultats prometteurs dans de nouvelles recherches

Un kit compact de détection rapide pour tester le virus Monkeypox montre des résultats prometteurs dans de nouvelles recherches

Dans un récent article du magazine Médecine des voyages et maladies infectieuses, les chercheurs ont présenté un kit compact de détection rapide qui teste les virus du Monkeypox en utilisant une combinaison d'amplification par recombinase polymérase (RPA) et de technologie de répétitions palindromiques courtes et régulièrement espacées (CRISPR).

Lernen: Taschenlabor zum schnellen Nachweis des Affenpockenvirus. Bildquelle: Tatiana Buzmakova/Shutterstock

arrière-plan

L’épidémie de variole du singe s’est propagée bien au-delà des pays d’endémie d’Afrique de l’Ouest et centrale en 2022, et l’Organisation mondiale de la santé (OMS) l’a désormais déclarée urgence de santé publique de portée internationale. L'agent pathogène étiologique de la variole du singe est le virus de la variole du singe, qui appartient au genre des orthopoxvirus.

Le test actuellement utilisé pour détecter la variole du singe est le test de réaction en chaîne par polymérase (PCR), qui amplifie l'acide désoxyribonucléique (ADN) de l'orthopoxvirus ou de virus spécifiques de la variole du singe. Cependant, la PCR est un processus long qui nécessite un thermocycleur, du personnel qualifié et un laboratoire.

La détection précoce et le confinement des personnes infectées sont essentiels pour contrôler une épidémie. Les tests immunologiques tels que les bandelettes à flux latéral sont plus simples et plus rapides que les PCR, mais présentent une réactivité croisée plus élevée avec les orthopoxvirus, ce qui rend difficile une détection précise du Monkeypox. Par conséquent, il est essentiel de disposer d’une technologie capable de détecter rapidement la variole du singe et de fournir des résultats précis et fiables.

Mécanisme de détection

Dans la présente étude, les chercheurs ont développé un kit de détection rapide ou un laboratoire de poche pour tester le virus de la variole du singe. Le kit de détection utilise les principes de la technologie RPA et CRISPR pour augmenter la spécificité et la sensibilité de l'analyse. La RPA amplifie les gènes cibles du virus de la variole du singe qui sont analysés par l'acide ribonucléique (ARN) guide CRISPR et l'enzyme protéine 12a (Cas12a) associée à CRISPR.

Le clivage de la séquence médié par CRISPR/Cas12sa se produit uniquement lorsque les amplicons cibles du Monkeypox sont reconnus, éliminant ainsi la possibilité de signaux non spécifiques. Le clivage entraîne une fluorescence, indiquant des échantillons positifs pour la variole du singe.

Laboratoire de poche

Le kit pesait 500 g et le boîtier était suffisamment étanche et compact pour tenir dans un sac. Les composants se composaient de deux blocs chauffants imprimés en trois dimensions : le bloc A, qui chauffe les échantillons à 80 °C pour la lyse de l'enveloppe virale, et le bloc B, qui chauffe les échantillons à 40 °C pour l'amplification de l'ADN.

Le kit comprenait des tubes contenant des enzymes lyophilisées protégées par du tréhalose et des tubes à échantillons contenant une solution de chlorure de sodium et d'acétate de magnésium. Un tampon de réhydratation contenant des amorces et le rapporteur de fluorescence ainsi qu'une lampe de poche ultraviolette (UV) pour détecter la fluorescence ont également été inclus dans le kit.

Pendant le processus de test, l'échantillon est placé dans le tube à échantillon et l'enveloppe virale est lysée à l'aide d'un bloc chauffant A. L'échantillon chauffé est ajouté au tube contenant les enzymes lyophilisées et le tampon de réhydratation est ajouté. Le bloc chauffant B est ensuite utilisé pour renforcer la région cible. Enfin, la fluorescence est détectée avec la lampe torche UV.

Au cours du test expérimental, les chercheurs ont prélevé des échantillons pseudotypés du virus de la variole du singe, la durée totale était de 25 minutes, et des échantillons contenant seulement dix particules virales ont été détectés avec précision.

Conclusions

En conclusion, les chercheurs ont présenté un nouveau kit de détection rapide, compact et pouvant être utilisé pour détecter le virus de la variole du singe sans recourir à des instruments compliqués, à des techniciens qualifiés ou à une configuration de laboratoire.

Le kit de détection utilise les principes de RPA et CRISPR pour amplifier les régions cibles de l'ADN du virus de la variole du singe et les cliver à l'aide du complexe CRISPR/Cas12a, avec un rapporteur fluorescent signalant la détection de l'ADN du virus de la variole du singe.

Les tests avec le virus pseudotypé ont montré une détection rapide et réussie du virus de la variole du singe, ce qui suggère que le kit pourrait potentiellement être utilisé pour tester rapidement les voyageurs et dans les zones dépourvues d'infrastructures médicales adéquates et de personnel qualifié.

Référence:

• Wei, J., Meng, X., Li, J. & Pang, B. (2022). Taschenlabor zum schnellen Nachweis des Affenpockenvirus. Reisemedizin und Infektionskrankheiten. tue ich: https://doi.org/10.1016/j.tmaid.2022.102478 https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1477893922002241?via%3Dihub

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