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Kit compacto de detecção rápida para teste do vírus Monkeypox mostra resultados promissores em novas pesquisas
Em um relatório recente na revista Travel Medicine and Infectious Diseases, os pesquisadores introduziram um kit compacto de detecção rápida que testa vírus da varíola dos macacos usando uma combinação de amplificação da polimerase recombinase (RPA) e tecnologia de repetições palindrômicas curtas regularmente interespaçadas agrupadas (CRISPR). Aprenda: Laboratório de bolso para detecção rápida do vírus da varíola dos macacos. Fonte da imagem: Tatiana Buzmakova/Shutterstock Antecedentes O surto de varíola dos macacos espalhou-se muito além dos países endémicos da África Ocidental e Central em 2022, e a Organização Mundial da Saúde (OMS) declarou-o agora uma emergência de saúde pública de preocupação internacional. O patógeno etiológico da varíola dos macacos é o vírus da varíola dos macacos, que pertence ao gênero dos ortopoxvírus. O teste atualmente usado para detectar a varíola dos macacos é o...
Kit compacto de detecção rápida para teste do vírus Monkeypox mostra resultados promissores em novas pesquisas
Em recente reportagem da revista Medicina de viagem e doenças infecciosas, os pesquisadores introduziram um kit compacto de detecção rápida que testa o vírus da varíola dos macacos usando uma combinação de amplificação da polimerase recombinase (RPA) e tecnologia de repetições palindrômicas curtas agrupadas regularmente interespaçadas (CRISPR).
Lernen: Taschenlabor zum schnellen Nachweis des Affenpockenvirus. Bildquelle: Tatiana Buzmakova/Shutterstock
fundo
O surto de varíola dos macacos espalhou-se muito para além dos países endémicos da África Ocidental e Central em 2022, e a Organização Mundial da Saúde (OMS) declarou-o agora uma emergência de saúde pública de preocupação internacional. O patógeno etiológico da varíola dos macacos é o vírus da varíola dos macacos, que pertence ao gênero dos ortopoxvírus.
O teste atualmente usado para detectar a varíola dos macacos é o teste de reação em cadeia da polimerase (PCR), que amplifica o ácido desoxirribonucléico (DNA) do ortopoxvírus ou de vírus específicos da varíola dos macacos. No entanto, a PCR é um processo demorado que requer um termociclador, pessoal treinado e um laboratório.
A detecção precoce e a contenção de indivíduos infectados são essenciais para controlar um surto de doença. Os imunoensaios, como as tiras de fluxo lateral, são mais simples e rápidos que os PCRs, mas apresentam maior reatividade cruzada para ortopoxvírus, dificultando a detecção precisa da varíola dos macacos. Portanto, a tecnologia que detecta a varíola dos macacos rapidamente e fornece resultados precisos e confiáveis é fundamental.
Mecanismo de detecção
No presente estudo, os pesquisadores desenvolveram um kit de detecção rápida ou um laboratório de bolso para testar o vírus da varíola dos macacos. O kit de detecção utiliza os princípios da tecnologia RPA e CRISPR para aumentar a especificidade e sensibilidade da análise. A RPA amplifica os genes alvo do vírus da varíola dos macacos que são escaneados pelo ácido ribonucleico (RNA) guia CRISPR e pela enzima proteína 12a (Cas12a) associada ao CRISPR.
A clivagem da sequência mediada por CRISPR/Cas12sa ocorre apenas quando os amplicons alvo da varíola dos macacos são reconhecidos, eliminando assim a possibilidade de sinais não específicos. A clivagem resulta em fluorescência, indicando amostras positivas para varíola dos macacos.
Laboratório de bolso
O kit pesava 500g e o case era à prova d'água e compacto o suficiente para caber em uma bolsa. Os componentes consistiam em dois blocos de aquecimento impressos tridimensionalmente – Bloco A, que aquece as amostras a 80 °C para lise do envelope viral, e Bloco B, que aquece as amostras a 40 °C para amplificação do DNA.
O kit incluía tubos contendo enzimas liofilizadas protegidas por trealose e tubos de amostra contendo solução de cloreto de sódio e acetato de magnésio. Um tampão de reidratação contendo primers e o repórter de fluorescência, bem como uma lanterna ultravioleta (UV) para detectar fluorescência também foram incluídos no kit.
Durante o processo de teste, a amostra é colocada no tubo de amostra e o envelope do vírus é lisado usando um bloco de aquecimento A. A amostra aquecida é adicionada ao tubo contendo as enzimas liofilizadas e o tampão de reidratação é adicionado. O bloco de aquecimento B é então usado para reforçar a região alvo. Finalmente, a fluorescência é detectada com a lanterna UV.
Durante o teste experimental, os pesquisadores conduziram amostras pseudotipadas do vírus da varíola dos macacos, o tempo total foi de 25 minutos e amostras contendo apenas dez partículas de vírus foram detectadas com precisão.
Conclusões
Concluindo, os pesquisadores apresentaram um novo kit de detecção rápida que era compacto e poderia ser usado para detectar o vírus da varíola dos macacos sem o uso de instrumentos complicados, técnicos treinados ou configuração de laboratório.
O kit de detecção usa os princípios de RPA e CRISPR para amplificar regiões alvo do DNA da varíola dos macacos e clivá-las usando o complexo CRISPR/Cas12a, com um repórter fluorescente sinalizando a detecção do DNA do vírus da varíola dos macacos.
Os testes com o vírus pseudotipado mostraram uma detecção rápida e bem sucedida do vírus da varíola dos macacos, sugerindo que o kit poderia ser potencialmente utilizado para testes rápidos de viajantes e em áreas que carecem de infra-estrutura médica adequada e de pessoal treinado.
Referência:
- Wei, J., Meng, X., Li, J. & Pang, B. (2022). Taschenlabor zum schnellen Nachweis des Affenpockenvirus. Reisemedizin und Infektionskrankheiten. tue ich: https://doi.org/10.1016/j.tmaid.2022.102478 https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1477893922002241?via%3Dihub
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