用于检测猴痘病毒的紧凑型快速检测试剂盒在新研究中显示出有希望的结果

用于检测猴痘病毒的紧凑型快速检测试剂盒在新研究中显示出有希望的结果

在该杂志最近的一篇报道中 旅行医学和传染病 研究人员推出了一种紧凑型快速检测试剂盒，该试剂盒结合使用重组酶聚合酶扩增（RPA）和成簇规则间隔短回文重复序列（CRISPR）技术来检测猴痘病毒。

Lernen: Taschenlabor zum schnellen Nachweis des Affenpockenvirus. Bildquelle: Tatiana Buzmakova/Shutterstock

背景

2022年，猴痘疫情已远远超出西非和中非流行国家，世界卫生组织（WHO）现已宣布其为国际关注的突发公共卫生事件。 猴痘的病原菌是猴痘病毒，属于正痘病毒属。

目前用于检测猴痘的测试是聚合酶链反应（PCR）测试，该测试扩增正痘病毒或特定猴痘病毒的脱氧核糖核酸（DNA）。 然而，PCR 是一个漫长的过程，需要热循环仪、训练有素的人员和实验室。

早期发现和遏制感染者对于控制疾病爆发至关重要。 侧流试纸条等免疫测定比 PCR 更简单、更快速，但对正痘病毒具有更高的交叉反应性，使得准确的猴痘检测变得困难。 因此，快速检测猴痘并提供准确可靠结果的技术至关重要。

检测机制

在本研究中，研究人员开发了一种快速检测试剂盒或袖珍实验室，用于检测猴痘病毒。 该检测试剂盒利用RPA和CRISPR技术原理，提高分析的特异性和灵敏度。 RPA 可扩增猴痘病毒靶基因，这些基因可通过 CRISPR 引导核糖核酸 (RNA) 和 CRISPR 相关蛋白 12a (Cas12a) 酶进行扫描。

仅当猴痘目标扩增子被识别时，CRISPR/Cas12sa 介导的序列切割才会发生，从而消除了非特异性信号的可能性。 裂解产生荧光，表明样本呈猴痘阳性。

袖珍实验室

该套件重 500 克，外壳防水且紧凑，足以放入包中。 该组件由两个三维打印的加热块组成：A 块将样品加热至 80°C 以进行病毒包膜裂解，B 块将样品加热至 40°C 以进行 DNA 扩增。

该试剂盒包括含有海藻糖保护的冻干酶的试管和含有氯化钠和醋酸镁溶液的样品管。 试剂盒中还包含含有引物和荧光报告基因的补液缓冲液以及用于检测荧光的紫外线 (UV) 手电筒。

测试过程中，将样品放入样品管中，使用加热块A裂解病毒包膜。将加热后的样品加入到含有冻干酶的管中，并加入补液缓冲液。 然后使用加热块 B 来加固目标区域。 最后，用紫外手电筒检测荧光。

在实验测试过程中，研究人员进行了假型猴痘病毒样本，总时间为25分钟，仅含有十个病毒颗粒的样本就被准确检测出来。

结论

总之，研究人员提出了一种新颖的快速检测试剂盒，该试剂盒结构紧凑，可用于检测猴痘病毒，而无需使用复杂的仪器、训练有素的技术人员或实验室设置。

该检测试剂盒利用 RPA 和 CRISPR 原理扩增猴痘 DNA 的目标区域，并使用 CRISPR/Cas12a 复合物切割它们，并用荧光报告基因发出检测猴痘病毒 DNA 的信号。

对假型病毒的测试表明，可以成功且快速地检测到猴痘病毒，这表明该试剂盒有可能用于对旅行者以及缺乏足够医疗基础设施和训练有素人员的地区进行快速检测。

参考：

• Wei, J., Meng, X., Li, J. & Pang, B. (2022). Taschenlabor zum schnellen Nachweis des Affenpockenvirus. Reisemedizin und Infektionskrankheiten. tue ich: https://doi.org/10.1016/j.tmaid.2022.102478 https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1477893922002241?via%3Dihub

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