Каква е ефективността на RT-PCR анализите за откриване на SARS-CoV-2 в човешка сперма?

Каква е ефективността на RT-PCR анализите за откриване на SARS-CoV-2 в човешка сперма?

Избухването на пандемията от тежкия остър респираторен синдром коронавирус 2 (SARS-CoV-2) подчерта опасенията относно пробите от сперма за криобанкиране.

Studie: Validierung eines SARS-CoV-2 RT-PCR-Assays: eine Voraussetzung zur Bewertung der Viruskontamination in menschlichem Sperma. Bildnachweis: Leonidovich/Shutterstock

SARS-CoV-2 използва рецептора на гостоприемника ангиотензин-конвертиращ ензим 2 (ACE2) и клетъчни кофактори като TMPRSS2, за да навлезе в целевите клетки. Преходна виремия по време на инфекция със SARS-CoV-2 и експресия на TMPRSS2 и ACE2 в тестисите и други допълнителни жлези може да доведе до секреция на SARS-CoV-2 в мъжкия репродуктивен тракт.

фон

Въпреки че репликацията на SARS-CoV-2 обикновено не се случва в мъжката репродуктивна система, някои специфични мъжки клетки могат да действат като вирусен резервоар след системна инфекция със SARS-CoV-2.

В допълнение, замърсяване на пробите от семена със SARS-CoV-2 може да възникне по време на събиране на сперма. Възможността за SARS-CoV-2 в проби от криоконсервирана сперма е проблем за пациентите, подложени на асистирана репродуктивна технология (ART) и лечение за запазване на фертилитета.

Към днешна дата четири проучвания предполагат наличието на генома на SARS-CoV-2 в проби от сперма. Три от тези проучвания са използвали търговски анализи на обратна транскрипция-полимеразна верижна реакция (RT-PCR) за оценка на проби от сперма, докато едно не описва механизма за откриване на вируса.

Тези проучвания обаче включват малка популация и не включват валидиран метод за откриване на SARS-CoV-2 в проби от сперма. В допълнение, повечето проучвания използват търговски RT-PCR анализи, одобрени само за респираторни проби и насочени само към два или три вирусни гена.

Три проучвания използват цифрова капкова PCR (dd-PCR) за добро откриване на генома на SARS-CoV-2. Въпреки това, типът проба, използвана в този метод, обикновено не е семена. При такива изследвания се изисква потвърждение на границата на откриване (LOD) за проби от сперма.

Друго проучване използва „тест SpermCOVID“ за откриване на генома на SARS-CoV-2 в респираторни проби, но не и в проби от сперма.

Ново проучване в Репродуктивна биомедицина онлайн Целта на списанието беше да се разработи стандартизиран протокол за откриване на РНК на SARS-CoV-2 във фракции от сперма, използвани за ART. Това беше високоефективен RT-PCR анализ, който използва проби от сперма и криоконсервирана семенна течност за откриване на SARS-CoV-2 РНК. В допълнение, ефективността на метода също беше определена въз основа на различните характеристики на семената.

Относно изследването

Проучването включва събиране на проби от сперма от пациенти, които са били подложени на рутинен анализ на сперма за безплодие между юли 2020 г. и март 2021 г., независимо от клиничните критерии, индекса на телесна маса или възрастта. Нито един от пациентите не съобщава за треска или други симптоми на SARS-CoV-2. Те също така съобщиха, че не са били изложени на никого със симптоми на SARS-CoV-2. След това бяха извършени конвенционален анализ на сперма, откриване на левкоцити и морфологична оценка, последвано от подготовка на пробата.

Нормозооспермичните проби се размразяват при 4°C и се събират за аналитично изследване. Екстракцията на РНК беше извършена от 160 µl от всяка проба, последвано от амплификация на генома на SARS-CoV-2 и аналитично валидиране на SARS-CoV-2 RT-PCR анализ. Беше анализирано влиянието на качеството на спермата въз основа на ефективността на RT-PCR. Накрая бяха извършени прецизни тестове, както и LOD и граница на количествено определяне (LOQ) за SARS-CoV-2 RT-PCR анализ.

Резултати

Резултатите показаха, че тестовете за прецизност отговарят на очакваните изисквания за типове семена с висока концентрация на SARS-CoV-2 РНК, за мишени на вируса N и ORF1ab и за типове семена с ниска концентрация на SARS-CoV-2 РНК. Освен това се съобщава, че S генът е най-малко чувствителната вирусна мишена на анализа, докато N генът е най-чувствителната мишена.

Беше наблюдавано, че криопротекторната среда и характеристиките на семената не оказват влияние върху ефективността на метода за откриване. LOD беше отчетен като 0,33 геномни копия на SARS-CoV-2/µL проба за семенна течност и 0,23 геномни копия на SARS-CoV-2/µL за сперматозоиди. И накрая, LOQ трябва да бъде едно копие на вирусен геном/µl от пробата.

Следователно това изследване може да определи наличието на РНК на SARS-CoV-2 в криоконсервирана сперма и семенна течност. Методът е ефективен независимо от характеристиките на спермата и вида на спермата. По този начин този метод може да гарантира безопасността на донорите на сперма и пациентите, които се възползват от техниките за запазване на плодовитостта по време на пандемията от SARS-CoV-2.

Справка:

• Chabrolles, H. et al. (2022). Validierung eines SARS-CoV-2 RT-PCR-Assays: eine Voraussetzung zur Bewertung der Viruskontamination in menschlichem Sperma. Reproduktionsbiomedizin online. doi: https://doi.org/10.1016/j.rbmo.2022.09.004. https://www.rbmojournal.com/article/S1472-6483(22)00684-8/fulltext#latedArticles.