Jaká je účinnost testů RT-PCR pro detekci SARS-CoV-2 v lidských spermech?

Jaká je účinnost testů RT-PCR pro detekci SARS-CoV-2 v lidských spermech?

Propuknutí pandemie těžkého akutního respiračního syndromu coronavirus 2 (SARS-CoV-2) upozornilo na obavy ohledně vzorků spermatu pro kryobanku.

Studie: Validierung eines SARS-CoV-2 RT-PCR-Assays: eine Voraussetzung zur Bewertung der Viruskontamination in menschlichem Sperma. Bildnachweis: Leonidovich/Shutterstock

SARS-CoV-2 využívá ke vstupu do cílových buněk hostitelský receptor angiotensin-konvertujícího enzymu 2 (ACE2) a buněčné kofaktory, jako je TMPRSS2. Přechodná virémie během infekce SARS-CoV-2 a exprese TMPRSS2 a ACE2 ve varlatech a dalších přídatných žlázách může vést k sekreci SARS-CoV-2 v mužském reprodukčním traktu.

pozadí

Ačkoli k replikaci SARS-CoV-2 obvykle nedochází v mužském reprodukčním systému, určité specifické mužské buňky mohou po systémové infekci SARS-CoV-2 fungovat jako virový rezervoár.

Kromě toho může během odběru spermatu dojít ke kontaminaci vzorků semen SARS-CoV-2. Možnost SARS-CoV-2 ve vzorcích kryokonzervovaného spermatu znepokojuje pacienty podstupující technologii asistované reprodukce (ART) a léčbu pro zachování plodnosti.

Dosud čtyři studie naznačovaly přítomnost genomu SARS-CoV-2 ve vzorcích spermatu. Tři z těchto studií používaly komerční testy reverzní transkripce-polymerázová řetězová reakce (RT-PCR) k hodnocení vzorků spermatu, zatímco jedna nepopisovala mechanismus detekce viru.

Tyto studie však zahrnovaly malou populaci a nezahrnovaly ověřenou metodu pro detekci SARS-CoV-2 ve vzorcích spermatu. Většina studií navíc používala komerční testy RT-PCR schválené pouze pro respirační vzorky a zaměřené pouze na dva nebo tři virové geny.

Tři studie použily digitální kapkovou PCR (dd-PCR) pro dobrou detekci genomu SARS-CoV-2. Typ vzorku použitý v této metodě však obvykle nebyla semena. Pro vzorky spermatu se v takových studiích vyžaduje potvrzení limitu detekce (LOD).

Jiná studie použila „test SpermCOVID“ k detekci genomu SARS-CoV-2 ve vzorcích dýchacích cest, ale ne ve vzorcích spermatu.

Nová studie v Reprodukční biomedicína online Cílem časopisu bylo vyvinout standardizovaný protokol pro detekci SARS-CoV-2 RNA ve frakcích spermatu používaných pro ART. Jednalo se o vysoce výkonný test RT-PCR, který používal vzorky spermií a kryokonzervovanou semennou tekutinu pro detekci RNA SARS-CoV-2. Kromě toho byla účinnost metody stanovena také na základě různých charakteristik semen.

O studiu

Studie zahrnovala odběr vzorků spermatu od pacientů, kteří podstoupili rutinní analýzu spermatu na neplodnost mezi červencem 2020 a březnem 2021, bez ohledu na klinická kritéria, index tělesné hmotnosti nebo věk. Žádný z pacientů neuvedl horečku nebo jiné příznaky SARS-CoV-2. Také uvedli, že nebyli vystaveni nikomu s příznaky SARS-CoV-2. Poté byla provedena konvenční analýza spermatu, detekce leukocytů a hodnocení morfologie a následně příprava vzorku.

Normozoospermické vzorky byly rozmraženy při 4 °C a spojeny pro analytické testování. Extrakce RNA byla provedena ze 160 ul každého vzorku, následovala amplifikace genomu SARS-CoV-2 a analytická validace testu SARS-CoV-2 RT-PCR. Byl analyzován vliv kvality spermií na účinnost RT-PCR. Nakonec bylo provedeno testování přesnosti a také LOD a limit kvantifikace (LOQ) pro test SARS-CoV-2 RT-PCR.

Výsledky

Výsledky ukázaly, že testy přesnosti splnily očekávané požadavky pro typy semen s vysokou koncentrací RNA SARS-CoV-2, pro cíle virů N a ORF1ab a pro typy semen s nízkou koncentrací RNA SARS-CoV-2. Kromě toho bylo hlášeno, že gen S byl nejméně citlivým virovým cílem testu, zatímco gen N byl nejcitlivějším cílem.

Bylo pozorováno, že kryoprotektivní médium a charakteristiky semen neměly žádný vliv na účinnost detekční metody. LOD byla hlášena jako 0,33 kopií genomu SARS-CoV-2/µl vzorku pro semennou tekutinu a 0,23 kopií genomu SARS-CoV-2/µl pro spermie. Konečně, LOQ by měla být jedna kopie virového genomu/µl vzorku.

Tato studie by tedy mohla určit přítomnost RNA SARS-CoV-2 v kryokonzervovaných spermiích a semenné tekutině. Metoda byla účinná bez ohledu na vlastnosti spermií a typ spermatu. Tato metoda tedy může zajistit bezpečnost dárců spermatu a pacientů, kteří těží z technik pro zachování plodnosti během pandemie SARS-CoV-2.

Odkaz:

• Chabrolles, H. et al. (2022). Validierung eines SARS-CoV-2 RT-PCR-Assays: eine Voraussetzung zur Bewertung der Viruskontamination in menschlichem Sperma. Reproduktionsbiomedizin online. doi: https://doi.org/10.1016/j.rbmo.2022.09.004. https://www.rbmojournal.com/article/S1472-6483(22)00684-8/fulltext#latedArticles.