Hvad er effektiviteten af ​​RT-PCR-assays til påvisning af SARS-CoV-2 i menneskelig sæd?

Hvad er effektiviteten af ​​RT-PCR-assays til påvisning af SARS-CoV-2 i menneskelig sæd?

Udbruddet af den alvorlige akutte respiratoriske syndrom coronavirus 2 (SARS-CoV-2) pandemi har fremhævet bekymringer vedrørende sædprøver til cryobanking.

Studie: Validierung eines SARS-CoV-2 RT-PCR-Assays: eine Voraussetzung zur Bewertung der Viruskontamination in menschlichem Sperma. Bildnachweis: Leonidovich/Shutterstock

SARS-CoV-2 bruger værtsreceptoren angiotensin-konverterende enzym 2 (ACE2) og cellulære cofaktorer såsom TMPRSS2 til at trænge ind i målceller. Forbigående viræmi under SARS-CoV-2-infektion og ekspression af TMPRSS2 og ACE2 i testiklerne og andre hjælpekirtler kan føre til sekretion af SARS-CoV-2 i den mandlige forplantningskanal.

baggrund

Selvom replikation af SARS-CoV-2 normalt ikke forekommer i det mandlige reproduktionssystem, kan visse specifikke mandlige celler fungere som et viralt reservoir efter systemisk SARS-CoV-2-infektion.

Derudover kan der forekomme kontaminering af frøprøverne med SARS-CoV-2 under sædopsamling. Muligheden for SARS-CoV-2 i kryokonserverede sædprøver er en bekymring for patienter, der gennemgår assisteret reproduktionsteknologi (ART) og fertilitetsbevarende behandling.

Til dato har fire undersøgelser antydet tilstedeværelsen af ​​SARS-CoV-2-genomet i sædprøver. Tre af disse undersøgelser brugte kommercielle revers transkription-polymerase kædereaktion (RT-PCR) assays til at evaluere sædprøver, mens en ikke beskrev mekanismen for virusdetektion.

Disse undersøgelser omfattede dog en lille population og omfattede ikke en valideret metode til påvisning af SARS-CoV-2 i sædprøver. Derudover brugte de fleste undersøgelser kommercielle RT-PCR-assays, der kun er godkendt til luftvejsprøver og kun rettet mod to eller tre virale gener.

Tre undersøgelser brugte digital dråbe-PCR (dd-PCR) til god påvisning af SARS-CoV-2-genomet. Imidlertid var den type prøve, der blev brugt i denne metode, normalt ikke frø. Detektionsgrænse (LOD) bekræftelse er påkrævet for sædprøver i sådanne undersøgelser.

En anden undersøgelse brugte en "SpermCOVID-test" til at påvise SARS-CoV-2-genomet i luftvejsprøver, men ikke i sædprøver.

En ny undersøgelse i Reproduktiv biomedicin online Formålet med tidsskriftet var at udvikle en standardiseret protokol for SARS-CoV-2 RNA-detektion i sædfraktioner, der anvendes til ART. Dette var et højtydende RT-PCR-assay, der brugte sædprøver og kryokonserveret sædvæske til SARS-CoV-2 RNA-detektion. Derudover blev metodens effektivitet også bestemt ud fra de forskellige frøegenskaber.

Om studiet

Undersøgelsen involverede indsamling af sædprøver fra patienter, der gennemgik rutinemæssig sædanalyse for infertilitet mellem juli 2020 og marts 2021, uanset kliniske kriterier, kropsmasseindeks eller alder. Ingen af ​​patienterne rapporterede at have feber eller andre symptomer på SARS-CoV-2. De rapporterede også, at de ikke havde været udsat for nogen med SARS-CoV-2-symptomer. Konventionel sædanalyse, leukocytdetektion og morfologivurdering blev derefter udført, efterfulgt af prøveforberedelse.

De normozoospermiske prøver blev optøet ved 4°C og samlet til analytisk testning. RNA-ekstraktion blev udført fra 160 µl af hver prøve, efterfulgt af amplifikation af SARS-CoV-2-genomet og analytisk validering af SARS-CoV-2 RT-PCR-assayet. Indflydelsen af ​​sædkvalitet baseret på effektiviteten af ​​RT-PCR blev analyseret. Endelig blev præcisionstestning samt LOD og kvantificeringsgrænse (LOQ) udført for SARS-CoV-2 RT-PCR-assayet.

Resultater

Resultaterne viste, at præcisionstestene opfyldte de forventede krav til frøtyper med høj SARS-CoV-2 RNA-koncentration, for N- og ORF1ab-virus-targets og for frøtyper med lav SARS-CoV-2 RNA-koncentration. Derudover blev det rapporteret, at S-genet var det mindst følsomme virale mål i assayet, mens N-genet var det mest følsomme mål.

Det blev observeret, at de kryobeskyttende medier og frøkarakteristika ikke havde nogen indflydelse på effektiviteten af ​​detektionsmetoden. LOD blev rapporteret som 0,33 SARS-CoV-2-genomkopier/µL prøve for sædvæske og 0,23 SARS-CoV-2-genomkopier/µL for spermatozoer. Endelig skal LOQ være én virusgenomkopi/µl af prøven.

Derfor kunne denne undersøgelse bestemme tilstedeværelsen af ​​SARS-CoV-2 RNA i kryokonserveret sæd og sædvæske. Metoden var effektiv uanset sædkarakteristika og sædtype. Således kan denne metode sikre sikkerheden for sæddonorer og patienter, der drager fordel af fertilitetsbevaringsteknikker under SARS-CoV-2-pandemien.

Reference:

• Chabrolles, H. et al. (2022). Validierung eines SARS-CoV-2 RT-PCR-Assays: eine Voraussetzung zur Bewertung der Viruskontamination in menschlichem Sperma. Reproduktionsbiomedizin online. doi: https://doi.org/10.1016/j.rbmo.2022.09.004. https://www.rbmojournal.com/article/S1472-6483(22)00684-8/fulltext#latedArticles.