Ποια είναι η αποτελεσματικότητα των αναλύσεων RT-PCR για την ανίχνευση του SARS-CoV-2 στο ανθρώπινο σπέρμα;

Ποια είναι η αποτελεσματικότητα των αναλύσεων RT-PCR για την ανίχνευση του SARS-CoV-2 στο ανθρώπινο σπέρμα;

Το ξέσπασμα της πανδημίας του σοβαρού οξέος αναπνευστικού συνδρόμου του κορωνοϊού 2 (SARS-CoV-2) έχει αναδείξει ανησυχίες σχετικά με τα δείγματα σπέρματος για κρυοτραπεζική.

Studie: Validierung eines SARS-CoV-2 RT-PCR-Assays: eine Voraussetzung zur Bewertung der Viruskontamination in menschlichem Sperma. Bildnachweis: Leonidovich/Shutterstock

Ο SARS-CoV-2 χρησιμοποιεί το ένζυμο μετατροπής της αγγειοτενσίνης 2 του υποδοχέα ξενιστή (ACE2) και κυτταρικούς συμπαράγοντες όπως το TMPRSS2 για να εισέλθει στα κύτταρα στόχους. Η παροδική ιαιμία κατά τη διάρκεια της μόλυνσης από SARS-CoV-2 και η έκφραση των TMPRSS2 και ACE2 στους όρχεις και άλλους βοηθητικούς αδένες μπορεί να οδηγήσει στην έκκριση του SARS-CoV-2 στην ανδρική αναπαραγωγική οδό.

φόντο

Αν και ο πολλαπλασιασμός του SARS-CoV-2 δεν συμβαίνει συνήθως στο ανδρικό αναπαραγωγικό σύστημα, ορισμένα συγκεκριμένα αρσενικά κύτταρα μπορούν να λειτουργήσουν ως ιική δεξαμενή μετά από συστηματική μόλυνση SARS-CoV-2.

Επιπλέον, μπορεί να συμβεί μόλυνση των δειγμάτων σπόρων με SARS-CoV-2 κατά τη συλλογή σπέρματος. Η πιθανότητα του SARS-CoV-2 σε κρυοσυντηρημένα δείγματα σπέρματος προκαλεί ανησυχία για ασθενείς που υποβάλλονται σε θεραπεία με τεχνολογία υποβοηθούμενης αναπαραγωγής (ART) και διατήρησης της γονιμότητας.

Μέχρι σήμερα, τέσσερις μελέτες έχουν προτείνει την παρουσία του γονιδιώματος SARS-CoV-2 σε δείγματα σπέρματος. Τρεις από αυτές τις μελέτες χρησιμοποίησαν εμπορικές δοκιμασίες ανάστροφης μεταγραφής-αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης (RT-PCR) για την αξιολόγηση δειγμάτων σπέρματος, ενώ μία δεν περιέγραψε τον μηχανισμό ανίχνευσης του ιού.

Ωστόσο, αυτές οι μελέτες περιελάμβαναν έναν μικρό πληθυσμό και δεν περιλάμβαναν μια επικυρωμένη μέθοδο για την ανίχνευση του SARS-CoV-2 σε δείγματα σπέρματος. Επιπλέον, οι περισσότερες μελέτες χρησιμοποίησαν εμπορικές αναλύσεις RT-PCR εγκεκριμένες μόνο για αναπνευστικά δείγματα και στοχεύουν μόνο δύο ή τρία ιικά γονίδια.

Τρεις μελέτες χρησιμοποίησαν ψηφιακή σταγονοειδή PCR (dd-PCR) για την καλή ανίχνευση του γονιδιώματος SARS-CoV-2. Ωστόσο, ο τύπος του δείγματος που χρησιμοποιήθηκε σε αυτή τη μέθοδο συνήθως δεν ήταν σπόροι. Απαιτείται επιβεβαίωση ορίου ανίχνευσης (LOD) για δείγματα σπέρματος σε τέτοιες μελέτες.

Μια άλλη μελέτη χρησιμοποίησε ένα «SpermCOVID test» για την ανίχνευση του γονιδιώματος SARS-CoV-2 σε αναπνευστικά δείγματα αλλά όχι σε δείγματα σπέρματος.

Μια νέα μελέτη στο Αναπαραγωγική βιοϊατρική στο διαδίκτυο Ο στόχος του περιοδικού ήταν να αναπτύξει ένα τυποποιημένο πρωτόκολλο για την ανίχνευση RNA του SARS-CoV-2 σε κλάσματα σπέρματος που χρησιμοποιούνται για την ART. Αυτή ήταν μια ανάλυση RT-PCR υψηλής απόδοσης που χρησιμοποίησε δείγματα σπέρματος και κρυοσυντηρημένο σπερματικό υγρό για την ανίχνευση RNA του SARS-CoV-2. Επιπλέον, η αποτελεσματικότητα της μεθόδου προσδιορίστηκε επίσης με βάση τα διάφορα χαρακτηριστικά των σπόρων.

Σχετικά με τη μελέτη

Η μελέτη αφορούσε τη συλλογή δειγμάτων σπέρματος από ασθενείς που υποβλήθηκαν σε ανάλυση σπέρματος ρουτίνας για υπογονιμότητα μεταξύ Ιουλίου 2020 και Μαρτίου 2021, ανεξάρτητα από κλινικά κριτήρια, δείκτη μάζας σώματος ή ηλικία. Κανένας από τους ασθενείς δεν ανέφερε πυρετό ή άλλα συμπτώματα του SARS-CoV-2. Ανέφεραν επίσης ότι δεν είχαν εκτεθεί σε κανέναν με συμπτώματα SARS-CoV-2. Στη συνέχεια πραγματοποιήθηκε συμβατική ανάλυση σπέρματος, ανίχνευση λευκοκυττάρων και μορφολογική αξιολόγηση, ακολουθούμενη από προετοιμασία δείγματος.

Τα νορμοζωοσπερμικά δείγματα αποψύχθηκαν στους 4°C και συγκεντρώθηκαν για αναλυτική δοκιμή. Πραγματοποιήθηκε εξαγωγή RNA από 160 μl κάθε δείγματος, ακολουθούμενη από ενίσχυση του γονιδιώματος SARS-CoV-2 και αναλυτική επικύρωση της δοκιμασίας SARS-CoV-2 RT-PCR. Η επίδραση της ποιότητας του σπέρματος με βάση την αποτελεσματικότητα της RT-PCR αναλύθηκε. Τέλος, πραγματοποιήθηκαν δοκιμές ακριβείας καθώς και LOD και όριο ποσοτικοποίησης (LOQ) για τη δοκιμασία SARS-CoV-2 RT-PCR.

Αποτελέσματα

Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι οι δοκιμές ακριβείας πληρούσαν τις αναμενόμενες απαιτήσεις για τύπους σπόρων με υψηλή συγκέντρωση RNA SARS-CoV-2, για στόχους ιού N και ORF1ab και για τύπους σπόρων με χαμηλή συγκέντρωση RNA SARS-CoV-2. Επιπλέον, αναφέρθηκε ότι το γονίδιο S ήταν ο λιγότερο ευαίσθητος ιικός στόχος της ανάλυσης, ενώ το γονίδιο Ν ήταν ο πιο ευαίσθητος στόχος.

Παρατηρήθηκε ότι τα κρυοπροστατευτικά μέσα και τα χαρακτηριστικά των σπόρων δεν είχαν καμία επίδραση στην αποτελεσματικότητα της μεθόδου ανίχνευσης. Το LOD αναφέρθηκε ως 0,33 αντίγραφα γονιδιώματος SARS-CoV-2/μL δείγμα για το σπερματικό υγρό και 0,23 αντίγραφα γονιδιώματος SARS-CoV-2/μL για τα σπερματοζωάρια. Τέλος, το LOQ θα πρέπει να είναι ένα αντίγραφο ιικού γονιδιώματος/μl του δείγματος.

Επομένως, αυτή η μελέτη θα μπορούσε να προσδιορίσει την παρουσία του RNA του SARS-CoV-2 σε κρυοσυντηρημένο σπέρμα και σπερματικό υγρό. Η μέθοδος ήταν αποτελεσματική ανεξάρτητα από τα χαρακτηριστικά του σπέρματος και τον τύπο του σπέρματος. Έτσι, αυτή η μέθοδος μπορεί να διασφαλίσει την ασφάλεια των δωρητών σπέρματος και των ασθενών που επωφελούνται από τις τεχνικές διατήρησης της γονιμότητας κατά τη διάρκεια της πανδημίας SARS-CoV-2.

Αναφορά:

• Chabrolles, H. et al. (2022). Validierung eines SARS-CoV-2 RT-PCR-Assays: eine Voraussetzung zur Bewertung der Viruskontamination in menschlichem Sperma. Reproduktionsbiomedizin online. doi: https://doi.org/10.1016/j.rbmo.2022.09.004. https://www.rbmojournal.com/article/S1472-6483(22)00684-8/fulltext#latedArticles.