¿Cuál es la eficacia de los ensayos de RT-PCR para detectar el SARS-CoV-2 en esperma humano?

¿Cuál es la eficacia de los ensayos de RT-PCR para detectar el SARS-CoV-2 en esperma humano?

El brote de la pandemia del coronavirus 2 (SARS-CoV-2), síndrome respiratorio agudo severo, ha puesto de relieve las preocupaciones con respecto a las muestras de semen para criobancos.

Studie: Validierung eines SARS-CoV-2 RT-PCR-Assays: eine Voraussetzung zur Bewertung der Viruskontamination in menschlichem Sperma. Bildnachweis: Leonidovich/Shutterstock

El SARS-CoV-2 utiliza la enzima convertidora de angiotensina 2 (ACE2) del receptor del huésped y cofactores celulares como TMPRSS2 para ingresar a las células objetivo. La viremia transitoria durante la infección por SARS-CoV-2 y la expresión de TMPRSS2 y ACE2 en los testículos y otras glándulas accesorias pueden provocar la secreción de SARS-CoV-2 en el tracto reproductivo masculino.

fondo

Aunque la replicación del SARS-CoV-2 no suele ocurrir en el sistema reproductivo masculino, ciertas células masculinas específicas pueden actuar como reservorio viral después de una infección sistémica por SARS-CoV-2.

Además, durante la recolección de semen puede producirse una contaminación de las muestras de semillas con SARS-CoV-2. La posibilidad de que haya SARS-CoV-2 en muestras de semen criopreservadas es una preocupación para los pacientes sometidos a tecnología de reproducción asistida (ART) y tratamientos de preservación de la fertilidad.

Hasta la fecha, cuatro estudios han sugerido la presencia del genoma del SARS-CoV-2 en muestras de semen. Tres de estos estudios utilizaron ensayos comerciales de reacción en cadena de la polimerasa con transcripción inversa (RT-PCR) para evaluar muestras de semen, mientras que uno no describió el mecanismo de detección del virus.

Sin embargo, estos estudios incluyeron una población pequeña y no incluyeron un método validado para detectar el SARS-CoV-2 en muestras de semen. Además, la mayoría de los estudios utilizaron ensayos comerciales de RT-PCR aprobados únicamente para muestras respiratorias y dirigidos únicamente a dos o tres genes virales.

Tres estudios utilizaron la PCR digital en gotas (dd-PCR) para una buena detección del genoma del SARS-CoV-2. Sin embargo, el tipo de muestra utilizado en este método generalmente no eran semillas. Se requiere la confirmación del límite de detección (LOD) para las muestras de semen en dichos estudios.

Otro estudio utilizó una “prueba SpermCOVID” para detectar el genoma del SARS-CoV-2 en muestras respiratorias pero no en muestras de semen.

Un nuevo estudio en el Biomedicina reproductiva en línea El objetivo de la revista era desarrollar un protocolo estandarizado para la detección del ARN del SARS-CoV-2 en fracciones de semen utilizadas para ART. Se trataba de un ensayo de RT-PCR de alto rendimiento que utilizaba muestras de esperma y líquido seminal criopreservado para la detección del ARN del SARS-CoV-2. Además, también se determinó la eficacia del método en función de las distintas características de las semillas.

Sobre el estudio

El estudio implicó la recolección de muestras de semen de pacientes que se sometieron a análisis de semen de rutina para detectar infertilidad entre julio de 2020 y marzo de 2021, independientemente de los criterios clínicos, el índice de masa corporal o la edad. Ninguno de los pacientes informó tener fiebre u otros síntomas del SARS-CoV-2. También informaron que no habían estado expuestos a nadie con síntomas de SARS-CoV-2. Luego se realizó un análisis de semen convencional, detección de leucocitos y evaluación de morfología, seguido de la preparación de la muestra.

Las muestras normozoospérmicas se descongelaron a 4°C y se combinaron para realizar pruebas analíticas. La extracción de ARN se realizó a partir de 160 µl de cada muestra, seguida de la amplificación del genoma del SARS-CoV-2 y la validación analítica del ensayo de RT-PCR del SARS-CoV-2. Se analizó la influencia de la calidad del esperma en función de la efectividad de la RT-PCR. Finalmente, se realizaron pruebas de precisión, así como LOD y límite de cuantificación (LOQ) para el ensayo de RT-PCR del SARS-CoV-2.

Resultados

Los resultados mostraron que las pruebas de precisión cumplieron con los requisitos esperados para los tipos de semillas con una alta concentración de ARN del SARS-CoV-2, para los objetivos de los virus N y ORF1ab y para los tipos de semillas con una baja concentración de ARN del SARS-CoV-2. Además, se informó que el gen S era el objetivo viral menos sensible del ensayo, mientras que el gen N era el objetivo más sensible.

Se observó que los medios crioprotectores y las características de las semillas no tuvieron influencia en la efectividad del método de detección. El LOD se informó como 0,33 copias del genoma del SARS-CoV-2/μl de muestra para el líquido seminal y 0,23 copias del genoma del SARS-CoV-2/μl para los espermatozoides. Finalmente, el LOQ debe ser una copia del genoma viral/μl de la muestra.

Por tanto, este estudio podría determinar la presencia de ARN del SARS-CoV-2 en espermatozoides y líquido seminal criopreservados. El método fue eficaz independientemente de las características del esperma y del tipo de semen. Por tanto, este método puede garantizar la seguridad de los donantes de esperma y de los pacientes que se benefician de las técnicas de preservación de la fertilidad durante la pandemia de SARS-CoV-2.

Referencia:

• Chabrolles, H. et al. (2022). Validierung eines SARS-CoV-2 RT-PCR-Assays: eine Voraussetzung zur Bewertung der Viruskontamination in menschlichem Sperma. Reproduktionsbiomedizin online. doi: https://doi.org/10.1016/j.rbmo.2022.09.004. https://www.rbmojournal.com/article/S1472-6483(22)00684-8/fulltext#latedArticles.