Milline on RT-PCR analüüside tõhusus SARS-CoV-2 tuvastamiseks inimese spermas?

Milline on RT-PCR analüüside tõhusus SARS-CoV-2 tuvastamiseks inimese spermas?

Raske ägeda respiratoorse sündroomi koroonaviiruse 2 (SARS-CoV-2) pandeemia puhang on toonud esile mured seoses krüopanganduseks kasutatavate spermaproovidega.

Studie: Validierung eines SARS-CoV-2 RT-PCR-Assays: eine Voraussetzung zur Bewertung der Viruskontamination in menschlichem Sperma. Bildnachweis: Leonidovich/Shutterstock

SARS-CoV-2 kasutab sihtrakkudesse sisenemiseks peremeesretseptori angiotensiini konverteerivat ensüümi 2 (ACE2) ja raku kofaktoreid, nagu TMPRSS2. Mööduv vireemia SARS-CoV-2 infektsiooni ajal ning TMPRSS2 ja ACE2 ekspressioon munandites ja teistes lisanäärmetes võivad viia SARS-CoV-2 sekretsioonini meeste suguelundites.

taustal

Kuigi SARS-CoV-2 replikatsioon meeste reproduktiivsüsteemis tavaliselt ei toimu, võivad teatud spetsiifilised isasrakud toimida viiruse reservuaarina pärast süsteemset SARS-CoV-2 nakatumist.

Lisaks võib sperma kogumise ajal esineda seemneproovide saastumist SARS-CoV-2-ga. SARS-CoV-2 võimalikkus külmsäilitatud spermaproovides teeb muret patsientidele, kes saavad abistava reproduktiivtehnoloogia (ART) ja viljakust säilitavat ravi.

Praeguseks on neli uuringut näidanud SARS-CoV-2 genoomi olemasolu spermaproovides. Neist kolmes uuringus kasutati spermaproovide hindamiseks kaubanduslikke pöördtranskriptsiooni-polümeraasi ahelreaktsiooni (RT-PCR) teste, samas kui ühes ei kirjeldatud viiruse tuvastamise mehhanismi.

Need uuringud hõlmasid siiski väikest populatsiooni ega sisaldanud valideeritud meetodit SARS-CoV-2 tuvastamiseks spermaproovides. Lisaks kasutati enamikus uuringutes kaubanduslikke RT-PCR analüüse, mis on heaks kiidetud ainult hingamisteede proovide jaoks ja mis olid suunatud ainult kahele või kolmele viiruse geenile.

Kolmes uuringus kasutati SARS-CoV-2 genoomi heaks tuvastamiseks digitaalset tilk-PCR-i (dd-PCR). Selle meetodi puhul ei kasutatud aga tavaliselt seemneid. Sellistes uuringutes on spermaproovide puhul nõutav avastamispiiri (LOD) kinnitus.

Teises uuringus kasutati "SpermCOVID-testi", et tuvastada SARS-CoV-2 genoom hingamisteede proovides, kuid mitte spermaproovides.

Uus uuring aastal Reproduktiivbiomeditsiin Internetis Ajakirja eesmärk oli välja töötada standardiseeritud protokoll SARS-CoV-2 RNA tuvastamiseks ART jaoks kasutatavates sperma fraktsioonides. See oli suure jõudlusega RT-PCR test, mis kasutas SARS-CoV-2 RNA tuvastamiseks spermaproove ja külmsäilitatud seemnevedelikku. Lisaks määrati meetodi tõhusus ka erinevate seemneomaduste põhjal.

Uuringu kohta

Uuring hõlmas spermaproovide kogumist patsientidelt, kellele tehti 2020. aasta juulist 2021. aasta märtsini viljatuse tuvastamiseks rutiinne spermaanalüüs, sõltumata kliinilistest kriteeriumidest, kehamassiindeksist või vanusest. Ükski patsient ei teatanud palavikust või muudest SARS-CoV-2 sümptomitest. Samuti teatasid nad, et nad ei olnud kokku puutunud kellegagi, kellel on SARS-CoV-2 sümptomid. Seejärel viidi läbi tavaline sperma analüüs, leukotsüütide tuvastamine ja morfoloogia hindamine, millele järgnes proovi ettevalmistamine.

Normosoospermilised proovid sulatati 4 °C juures ja ühendati analüütiliseks testimiseks. RNA ekstraheerimine viidi läbi 160 µl igast proovist, millele järgnes SARS-CoV-2 genoomi amplifitseerimine ja SARS-CoV-2 RT-PCR analüüsi analüütiline valideerimine. Analüüsiti sperma kvaliteedi mõju RT-PCR efektiivsuse põhjal. Lõpuks viidi SARS-CoV-2 RT-PCR testi jaoks läbi täpsustestid, samuti LOD ja kvantifitseerimispiir (LOQ).

Tulemused

Tulemused näitasid, et täppistestid vastasid oodatud nõuetele kõrge SARS-CoV-2 RNA kontsentratsiooniga seemnetüüpide, N- ja ORF1ab viiruse sihtmärkide ning madala SARS-CoV-2 RNA kontsentratsiooniga seemnetüüpide puhul. Lisaks teatati, et S-geen oli testi kõige vähem tundlik viiruse sihtmärk, samas kui N-geen oli kõige tundlikum sihtmärk.

Täheldati, et krüoprotektori sööde ja seemnete omadused ei mõjutanud tuvastamismeetodi tõhusust. LOD teatati kui 0,33 SARS-CoV-2 genoomi koopiat/µl seemnevedeliku kohta ja 0,23 SARS-CoV-2 genoomi koopiat/µl spermatosoidide puhul. Lõpuks peaks LOQ olema üks viiruse genoomi koopia proovi µl kohta.

Seetõttu võib see uuring määrata SARS-CoV-2 RNA olemasolu külmsäilitatud spermas ja seemnevedelikus. Meetod oli efektiivne sõltumata sperma omadustest ja sperma tüübist. Seega võib see meetod tagada spermadoonorite ja patsientide ohutuse, kes saavad SARS-CoV-2 pandeemia ajal viljakuse säilitamise tehnikatest kasu.

Viide:

• Chabrolles, H. et al. (2022). Validierung eines SARS-CoV-2 RT-PCR-Assays: eine Voraussetzung zur Bewertung der Viruskontamination in menschlichem Sperma. Reproduktionsbiomedizin online. doi: https://doi.org/10.1016/j.rbmo.2022.09.004. https://www.rbmojournal.com/article/S1472-6483(22)00684-8/fulltext#latedArticles.