Suche
Mein Konto
Koja je učinkovitost RT-PCR testova za otkrivanje SARS-CoV-2 u ljudskoj spermi?
Izbijanje pandemije teškog akutnog respiratornog sindroma koronavirusa 2 (SARS-CoV-2) istaknulo je zabrinutost u vezi s uzorcima sjemena za kriobankarstvo. Studija: Validacija SARS-CoV-2 RT-PCR testa: preduvjet za procjenu virusne kontaminacije u ljudskom sjemenu. Kredit za sliku: Leonidovich/Shutterstock SARS-CoV-2 koristi receptor domaćina angiotenzin-konvertirajući enzim 2 (ACE2) i stanične kofaktore kao što je TMPRSS2 za ulazak u ciljne stanice. Prolazna viremija tijekom infekcije SARS-CoV-2 i ekspresija TMPRSS2 i ACE2 u testisima i drugim pomoćnim žlijezdama može dovesti do izlučivanja SARS-CoV-2 u muškom reproduktivnom traktu. Pozadina Iako se replikacija SARS-CoV-2 obično ne događa u muškom reproduktivnom sustavu, određene specifične muške stanice mogu...
Koja je učinkovitost RT-PCR testova za otkrivanje SARS-CoV-2 u ljudskoj spermi?
Izbijanje pandemije teškog akutnog respiratornog sindroma koronavirusa 2 (SARS-CoV-2) istaknulo je zabrinutost u vezi s uzorcima sjemena za kriobankarstvo.
Studie: Validierung eines SARS-CoV-2 RT-PCR-Assays: eine Voraussetzung zur Bewertung der Viruskontamination in menschlichem Sperma. Bildnachweis: Leonidovich/Shutterstock
SARS-CoV-2 koristi receptor domaćina angiotenzin-konvertirajući enzim 2 (ACE2) i stanične kofaktore kao što je TMPRSS2 za ulazak u ciljne stanice. Prolazna viremija tijekom infekcije SARS-CoV-2 i ekspresija TMPRSS2 i ACE2 u testisima i drugim pomoćnim žlijezdama može dovesti do izlučivanja SARS-CoV-2 u muškom reproduktivnom traktu.
pozadina
Iako se replikacija SARS-CoV-2 obično ne događa u muškom reproduktivnom sustavu, određene specifične muške stanice mogu djelovati kao virusni rezervoar nakon sistemske infekcije SARS-CoV-2.
Osim toga, može doći do kontaminacije uzoraka sjemena SARS-CoV-2 tijekom prikupljanja sjemena. Mogućnost SARS-CoV-2 u kriokonzerviranim uzorcima sjemena zabrinjava pacijente koji su podvrgnuti potpomognutoj reproduktivnoj tehnologiji (ART) i tretmanu za očuvanje plodnosti.
Do danas su četiri studije ukazale na prisutnost genoma SARS-CoV-2 u uzorcima sjemena. Tri od ovih studija koristile su komercijalne testove reverzne transkripcije-lančane reakcije polimeraze (RT-PCR) za procjenu uzoraka sjemena, dok jedna nije opisala mehanizam detekcije virusa.
Međutim, te su studije uključile malu populaciju i nisu uključivale validiranu metodu za otkrivanje SARS-CoV-2 u uzorcima sjemena. Osim toga, većina studija koristila je komercijalne RT-PCR testove odobrene samo za respiratorne uzorke i usmjerene samo na dva ili tri virusna gena.
Tri studije koristile su digitalni kapljični PCR (dd-PCR) za dobru detekciju genoma SARS-CoV-2. Međutim, tip uzorka korišten u ovoj metodi obično nije bio sjeme. Za uzorke sjemena u takvim studijama potrebna je potvrda granice detekcije (LOD).
Druga studija koristila je "SpermCOVID test" za otkrivanje genoma SARS-CoV-2 u respiratornim uzorcima, ali ne i u uzorcima sjemena.
Nova studija u Reproduktivna biomedicina online Cilj časopisa bio je razviti standardizirani protokol za detekciju RNK SARS-CoV-2 u frakcijama sjemena koje se koriste za ART. Ovo je bio RT-PCR test visokih performansi koji je koristio uzorke sperme i kriokonzerviranu sjemenu tekućinu za otkrivanje SARS-CoV-2 RNA. Osim toga, učinkovitost metode određena je i na temelju različitih karakteristika sjemena.
O studiju
Studija je uključivala prikupljanje uzoraka sjemena od pacijenata koji su bili podvrgnuti rutinskoj analizi sjemena za neplodnost između srpnja 2020. i ožujka 2021., bez obzira na kliničke kriterije, indeks tjelesne mase ili dob. Nijedan od pacijenata nije prijavio temperaturu ili druge simptome SARS-CoV-2. Također su izvijestili da nisu bili izloženi nikome sa simptomima SARS-CoV-2. Zatim je provedena konvencionalna analiza sjemena, detekcija leukocita i procjena morfologije, a zatim priprema uzorka.
Normozoospermijski uzorci otopljeni su na 4°C i skupljeni za analitičko ispitivanje. Ekstrakcija RNA provedena je iz 160 µl svakog uzorka, nakon čega je uslijedila amplifikacija genoma SARS-CoV-2 i analitička validacija SARS-CoV-2 RT-PCR testa. Analiziran je utjecaj kvalitete sperme na temelju učinkovitosti RT-PCR. Konačno, izvršeno je testiranje preciznosti, kao i LOD i granica kvantifikacije (LOQ) za SARS-CoV-2 RT-PCR test.
Rezultati
Rezultati su pokazali da su testovi preciznosti zadovoljili očekivane zahtjeve za vrste sjemena s visokom koncentracijom SARS-CoV-2 RNA, za mete virusa N i ORF1ab i za vrste sjemena s niskom koncentracijom SARS-CoV-2 RNA. Osim toga, objavljeno je da je S gen bio najmanje osjetljiva virusna meta testa, dok je N gen bio najosjetljivija meta.
Uočeno je da krioprotektorske podloge i karakteristike sjemena nisu utjecale na učinkovitost metode detekcije. LOD je prijavljen kao 0,33 kopije genoma SARS-CoV-2/µL uzorak za sjemenu tekućinu i 0,23 kopije genoma SARS-CoV-2/µL za spermatozoid. Konačno, LOQ bi trebao biti jedna kopija virusnog genoma/µl uzorka.
Stoga bi ova studija mogla odrediti prisutnost SARS-CoV-2 RNA u kriokonzerviranoj spermi i sjemenoj tekućini. Metoda je bila učinkovita bez obzira na karakteristike spermija i vrstu sjemena. Stoga ova metoda može osigurati sigurnost donatora sperme i pacijenata koji imaju koristi od tehnika očuvanja plodnosti tijekom pandemije SARS-CoV-2.
Referenca:
- Chabrolles, H. et al. (2022). Validierung eines SARS-CoV-2 RT-PCR-Assays: eine Voraussetzung zur Bewertung der Viruskontamination in menschlichem Sperma. Reproduktionsbiomedizin online. doi: https://doi.org/10.1016/j.rbmo.2022.09.004. https://www.rbmojournal.com/article/S1472-6483(22)00684-8/fulltext#latedArticles.