Kāda ir RT-PCR analīžu efektivitāte SARS-CoV-2 noteikšanai cilvēka spermā?

Kāda ir RT-PCR analīžu efektivitāte SARS-CoV-2 noteikšanai cilvēka spermā?

Smaga akūta respiratorā sindroma koronavīrusa 2 (SARS-CoV-2) pandēmijas uzliesmojums ir uzsvēris bažas par spermas paraugiem kriobankēšanai.

Studie: Validierung eines SARS-CoV-2 RT-PCR-Assays: eine Voraussetzung zur Bewertung der Viruskontamination in menschlichem Sperma. Bildnachweis: Leonidovich/Shutterstock

SARS-CoV-2 izmanto saimniekreceptoru angiotenzīnu konvertējošo enzīmu 2 (ACE2) un šūnu kofaktorus, piemēram, TMPRSS2, lai iekļūtu mērķa šūnās. Pārejoša virēmija SARS-CoV-2 infekcijas laikā un TMPRSS2 un ACE2 ekspresija sēkliniekos un citos palīgdziedzeros var izraisīt SARS-CoV-2 sekrēciju vīriešu reproduktīvajā traktā.

fons

Lai gan SARS-CoV-2 replikācija parasti nenotiek vīriešu reproduktīvajā sistēmā, noteiktas specifiskas vīriešu šūnas var darboties kā vīrusu rezervuārs pēc sistēmiskas SARS-CoV-2 infekcijas.

Turklāt sēklas paraugu piesārņojums ar SARS-CoV-2 var notikt spermas savākšanas laikā. SARS-CoV-2 iespējamība kriokonservētos spermas paraugos rada bažas pacientiem, kuriem tiek veikta mākslīgās reproduktīvās tehnoloģijas (ART) un auglības saglabāšanas ārstēšana.

Līdz šim četri pētījumi liecina par SARS-CoV-2 genoma klātbūtni spermas paraugos. Trīs no šiem pētījumiem izmantoja komerciālus reversās transkripcijas-polimerāzes ķēdes reakcijas (RT-PCR) testus, lai novērtētu spermas paraugus, savukārt vienā netika aprakstīts vīrusa noteikšanas mehānisms.

Tomēr šajos pētījumos bija iekļauta neliela populācija un netika iekļauta apstiprināta metode SARS-CoV-2 noteikšanai spermas paraugos. Turklāt lielākajā daļā pētījumu tika izmantoti komerciāli RT-PCR testi, kas apstiprināti tikai elpošanas paraugiem un bija paredzēti tikai diviem vai trim vīrusu gēniem.

Trīs pētījumos izmantoja digitālo pilienu PCR (dd-PCR), lai labi noteiktu SARS-CoV-2 genomu. Tomēr šajā metodē izmantotais paraugs parasti nebija sēklas. Šādos pētījumos spermas paraugiem ir nepieciešams noteikšanas robežas (LOD) apstiprinājums.

Citā pētījumā tika izmantots “SpermCOVID tests”, lai noteiktu SARS-CoV-2 genomu elpceļu paraugos, bet ne spermas paraugos.

Jauns pētījums Reproduktīvā biomedicīna tiešsaistē Žurnāla mērķis bija izstrādāt standartizētu protokolu SARS-CoV-2 RNS noteikšanai ART izmantotajās spermas frakcijās. Šis bija augstas veiktspējas RT-PCR tests, kurā SARS-CoV-2 RNS noteikšanai tika izmantoti spermas paraugi un kriokonservēts sēklas šķidrums. Turklāt metodes efektivitāte tika noteikta arī, pamatojoties uz dažādām sēklu īpašībām.

Par pētījumu

Pētījumā tika ņemti spermas paraugi no pacientiem, kuriem no 2020. gada jūlija līdz 2021. gada martam tika veikta regulāra spermas analīze, lai noteiktu neauglību, neatkarīgi no klīniskajiem kritērijiem, ķermeņa masas indeksa vai vecuma. Neviens no pacientiem neziņoja par drudzi vai citiem SARS-CoV-2 simptomiem. Viņi arī ziņoja, ka viņi nav bijuši pakļauti nevienam ar SARS-CoV-2 simptomiem. Pēc tam tika veikta parastā spermas analīze, leikocītu noteikšana un morfoloģijas novērtējums, kam sekoja parauga sagatavošana.

Normozoospermiskie paraugi tika atkausēti 4 ° C temperatūrā un apvienoti analītiskajai pārbaudei. RNS ekstrakcija tika veikta no 160 µl katra parauga, kam sekoja SARS-CoV-2 genoma pastiprināšana un SARS-CoV-2 RT-PCR testa analītiskā validācija. Tika analizēta spermas kvalitātes ietekme, pamatojoties uz RT-PCR efektivitāti. Visbeidzot, SARS-CoV-2 RT-PCR testam tika veikta precizitātes pārbaude, kā arī LOD un kvantitatīvās noteikšanas robeža (LOQ).

Rezultāti

Rezultāti parādīja, ka precizitātes testi atbilda paredzamajām prasībām sēklu veidiem ar augstu SARS-CoV-2 RNS koncentrāciju, N un ORF1ab vīrusa mērķiem un sēklu veidiem ar zemu SARS-CoV-2 RNS koncentrāciju. Turklāt tika ziņots, ka S gēns bija vismazāk jutīgais testa vīrusa mērķis, savukārt N gēns bija visjutīgākais mērķis.

Tika novērots, ka krioaizsargājošā barotne un sēklu īpašības neietekmē noteikšanas metodes efektivitāti. LOD tika ziņots kā 0,33 SARS-CoV-2 genoma kopijas/µL sēklas šķidrumam un 0,23 SARS-CoV-2 genoma kopijas/µL spermatozoīdiem. Visbeidzot, LOQ jābūt vienai vīrusa genoma kopijai uz µl parauga.

Tāpēc šis pētījums varētu noteikt SARS-CoV-2 RNS klātbūtni kriokonservētā spermā un sēklas šķidrumā. Metode bija efektīva neatkarīgi no spermas īpašībām un spermas veida. Tādējādi šī metode var nodrošināt spermas donoru un pacientu drošību, kuri gūst labumu no auglības saglabāšanas metodēm SARS-CoV-2 pandēmijas laikā.

Atsauce:

• Chabrolles, H. et al. (2022). Validierung eines SARS-CoV-2 RT-PCR-Assays: eine Voraussetzung zur Bewertung der Viruskontamination in menschlichem Sperma. Reproduktionsbiomedizin online. doi: https://doi.org/10.1016/j.rbmo.2022.09.004. https://www.rbmojournal.com/article/S1472-6483(22)00684-8/fulltext#latedArticles.