Hva er effektiviteten av RT-PCR-analyser for å påvise SARS-CoV-2 i menneskelig sæd?

Hva er effektiviteten av RT-PCR-analyser for å påvise SARS-CoV-2 i menneskelig sæd?

Utbruddet av den alvorlige akutte respiratoriske syndromet coronavirus 2 (SARS-CoV-2) pandemien har fremhevet bekymringer angående sædprøver for cryobanking.

Studie: Validierung eines SARS-CoV-2 RT-PCR-Assays: eine Voraussetzung zur Bewertung der Viruskontamination in menschlichem Sperma. Bildnachweis: Leonidovich/Shutterstock

SARS-CoV-2 bruker vertsreseptoren angiotensin-konverterende enzym 2 (ACE2) og cellulære kofaktorer som TMPRSS2 for å gå inn i målceller. Forbigående viremi under SARS-CoV-2-infeksjon og ekspresjon av TMPRSS2 og ACE2 i testiklene og andre hjelpekjertler kan føre til sekresjon av SARS-CoV-2 i den mannlige reproduktive kanalen.

bakgrunn

Selv om replikering av SARS-CoV-2 vanligvis ikke forekommer i det mannlige reproduksjonssystemet, kan visse spesifikke mannlige celler fungere som et viralt reservoar etter systemisk SARS-CoV-2-infeksjon.

I tillegg kan kontaminering av frøprøvene med SARS-CoV-2 forekomme under sædinnsamling. Muligheten for SARS-CoV-2 i kryokonserverte sædprøver er en bekymring for pasienter som gjennomgår assistert reproduksjonsteknologi (ART) og fertilitetsbevarende behandling.

Til dags dato har fire studier antydet tilstedeværelsen av SARS-CoV-2-genomet i sædprøver. Tre av disse studiene brukte kommersielle revers transkripsjon-polymerasekjedereaksjon (RT-PCR) analyser for å evaluere sædprøver, mens en ikke beskrev mekanismen for virusdeteksjon.

Disse studiene inkluderte imidlertid en liten populasjon og inkluderte ikke en validert metode for å påvise SARS-CoV-2 i sædprøver. I tillegg brukte de fleste studier kommersielle RT-PCR-analyser som kun er godkjent for luftveisprøver og kun rettet mot to eller tre virale gener.

Tre studier brukte digital dråpe-PCR (dd-PCR) for god påvisning av SARS-CoV-2-genomet. Imidlertid var prøvetypen som ble brukt i denne metoden vanligvis ikke frø. Det kreves bekreftelse på deteksjonsgrense (LOD) for sædprøver i slike studier.

En annen studie brukte en "SpermCOVID-test" for å oppdage SARS-CoV-2-genomet i luftveisprøver, men ikke i sædprøver.

En ny studie i Reproduktiv biomedisin på nett Målet med tidsskriftet var å utvikle en standardisert protokoll for SARS-CoV-2 RNA-deteksjon i sædfraksjoner brukt til ART. Dette var en høyytelses RT-PCR-analyse som brukte sædprøver og kryokonservert sædvæske for SARS-CoV-2 RNA-deteksjon. I tillegg ble effektiviteten av metoden også bestemt ut fra de ulike frøegenskapene.

Om studiet

Studien innebar å samle inn sædprøver fra pasienter som gjennomgikk rutinemessig sædanalyse for infertilitet mellom juli 2020 og mars 2021, uavhengig av kliniske kriterier, kroppsmasseindeks eller alder. Ingen av pasientene rapporterte å ha feber eller andre symptomer på SARS-CoV-2. De rapporterte også at de ikke hadde blitt eksponert for noen med SARS-CoV-2-symptomer. Konvensjonell sædanalyse, leukocyttdeteksjon og morfologivurdering ble deretter utført, etterfulgt av prøvepreparering.

De normozoospermiske prøvene ble tint ved 4°C og samlet for analytisk testing. RNA-ekstraksjon ble utført fra 160 µl av hver prøve, etterfulgt av amplifisering av SARS-CoV-2-genomet og analytisk validering av SARS-CoV-2 RT-PCR-analysen. Påvirkningen av sædkvalitet basert på effektiviteten av RT-PCR ble analysert. Til slutt ble presisjonstesting samt LOD og kvantifiseringsgrense (LOQ) utført for SARS-CoV-2 RT-PCR-analysen.

Resultater

Resultatene viste at presisjonstestene oppfylte de forventede kravene for frøtyper med høy SARS-CoV-2 RNA-konsentrasjon, for N- og ORF1ab-virusmål, og for frøtyper med lav SARS-CoV-2 RNA-konsentrasjon. I tillegg ble det rapportert at S-genet var det minst følsomme virale målet for analysen, mens N-genet var det mest følsomme målet.

Det ble observert at kryobeskyttelsesmediet og frøegenskapene ikke hadde noen innflytelse på effektiviteten til deteksjonsmetoden. LOD ble rapportert som 0,33 SARS-CoV-2-genomkopier/µL prøve for sædvæske og 0,23 SARS-CoV-2-genomkopier/µL for sædceller. Til slutt bør LOQ være én virusgenomkopi/µl av prøven.

Derfor kan denne studien bestemme tilstedeværelsen av SARS-CoV-2 RNA i kryokonservert sæd og sædvæske. Metoden var effektiv uavhengig av sædegenskaper og sædtype. Dermed kan denne metoden sikre sikkerheten til sæddonorer og pasienter som drar nytte av fertilitetsbevaringsteknikker under SARS-CoV-2-pandemien.

Referanse:

• Chabrolles, H. et al. (2022). Validierung eines SARS-CoV-2 RT-PCR-Assays: eine Voraussetzung zur Bewertung der Viruskontamination in menschlichem Sperma. Reproduktionsbiomedizin online. doi: https://doi.org/10.1016/j.rbmo.2022.09.004. https://www.rbmojournal.com/article/S1472-6483(22)00684-8/fulltext#latedArticles.