Care este eficacitatea testelor RT-PCR pentru detectarea SARS-CoV-2 în sperma umană?

Care este eficacitatea testelor RT-PCR pentru detectarea SARS-CoV-2 în sperma umană?

Epidemia de coronavirus 2 (SARS-CoV-2) a sindromului respirator acut sever a evidențiat preocupări cu privire la probele de material seminal pentru criobancare.

Studie: Validierung eines SARS-CoV-2 RT-PCR-Assays: eine Voraussetzung zur Bewertung der Viruskontamination in menschlichem Sperma. Bildnachweis: Leonidovich/Shutterstock

SARS-CoV-2 folosește enzima 2 de conversie a angiotensinei receptorului gazdă (ACE2) și cofactori celulari, cum ar fi TMPRSS2, pentru a pătrunde în celulele țintă. Viremia tranzitorie în timpul infecției cu SARS-CoV-2 și expresia TMPRSS2 și ACE2 în testicul și alte glande accesorii pot duce la secreția SARS-CoV-2 în tractul reproducător masculin.

fundal

Deși replicarea SARS-CoV-2 nu are loc de obicei în sistemul reproducător masculin, anumite celule masculine specifice pot acționa ca un rezervor viral după infecția sistemică cu SARS-CoV-2.

În plus, contaminarea probelor de semințe cu SARS-CoV-2 poate apărea în timpul colectării materialului seminal. Posibilitatea SARS-CoV-2 în probele de material seminal crioconservat este o preocupare pentru pacienții care urmează tratament cu tehnologie de reproducere asistată (ART) și pentru conservarea fertilității.

Până în prezent, patru studii au sugerat prezența genomului SARS-CoV-2 în probele de sperma. Trei dintre aceste studii au folosit teste comerciale de transcripție inversă-reacție în lanț a polimerazei (RT-PCR) pentru a evalua probe de sperma, în timp ce unul nu a descris mecanismul de detectare a virusului.

Cu toate acestea, aceste studii au inclus o populație mică și nu au inclus o metodă validată pentru detectarea SARS-CoV-2 în probele de spermă. În plus, majoritatea studiilor au folosit teste comerciale RT-PCR aprobate numai pentru probe respiratorii și care vizează doar două sau trei gene virale.

Trei studii au folosit PCR cu picături digitale (dd-PCR) pentru o bună detectare a genomului SARS-CoV-2. Cu toate acestea, tipul de eșantion utilizat în această metodă nu a fost de obicei semințe. Confirmarea limitei de detecție (LOD) este necesară pentru probele de material seminal în astfel de studii.

Un alt studiu a folosit un „test SpermCOVID” pentru a detecta genomul SARS-CoV-2 în probe respiratorii, dar nu și în probele de sperma.

Un nou studiu în Biomedicina reproductivă online Scopul revistei a fost de a dezvolta un protocol standardizat pentru detectarea ARN-ului SARS-CoV-2 în fracțiile de material seminal utilizate pentru ART. Acesta a fost un test RT-PCR de înaltă performanță care a folosit mostre de spermă și lichid seminal crioconservat pentru detectarea ARN-ului SARS-CoV-2. În plus, eficacitatea metodei a fost determinată și pe baza diferitelor caracteristici ale semințelor.

Despre studiu

Studiul a implicat colectarea de probe de material seminal de la pacienți care au fost supuși analizei de rutină a materialului seminal pentru infertilitate între iulie 2020 și martie 2021, indiferent de criteriile clinice, indicele de masă corporală sau vârstă. Niciunul dintre pacienți nu a raportat să aibă febră sau alte simptome ale SARS-CoV-2. De asemenea, au raportat că nu au fost expuși la nimeni cu simptome SARS-CoV-2. S-au efectuat apoi analiza convențională a materialului seminal, detectarea leucocitelor și evaluarea morfologiei, urmate de pregătirea probei.

Probele normozoospermice au fost dezghețate la 4°C și reunite pentru testare analitică. Extracția ARN a fost efectuată din 160 µl din fiecare probă, urmată de amplificarea genomului SARS-CoV-2 și validarea analitică a testului SARS-CoV-2 RT-PCR. A fost analizată influența calității spermei pe baza eficacității RT-PCR. În cele din urmă, au fost efectuate teste de precizie, precum și LOD și limita de cuantificare (LOQ) pentru testul SARS-CoV-2 RT-PCR.

Rezultate

Rezultatele au arătat că testele de precizie au îndeplinit cerințele așteptate pentru tipurile de semințe cu concentrație mare de ARN SARS-CoV-2, pentru ținte de virus N și ORF1ab și pentru tipurile de semințe cu concentrație scăzută de ARN SARS-CoV-2. În plus, sa raportat că gena S a fost ținta virală cel mai puțin sensibilă a testului, în timp ce gena N a fost ținta cea mai sensibilă.

S-a observat că mediul crioprotector și caracteristicile semințelor nu au influențat eficacitatea metodei de detectare. LOD a fost raportat ca 0,33 copii ale genomului SARS-CoV-2/µL probă pentru lichidul seminal și 0,23 copii ale genomului SARS-CoV-2/µL pentru spermatozoizi. În cele din urmă, LOQ ar trebui să fie o copie a genomului viral/µl de probă.

Prin urmare, acest studiu ar putea determina prezența ARN-ului SARS-CoV-2 în sperma și lichidul seminal crioconservat. Metoda a fost eficientă indiferent de caracteristicile spermei și de tipul spermei. Astfel, această metodă poate asigura siguranța donatorilor de spermă și a pacienților care beneficiază de tehnici de conservare a fertilității în timpul pandemiei SARS-CoV-2.

Referinţă:

• Chabrolles, H. et al. (2022). Validierung eines SARS-CoV-2 RT-PCR-Assays: eine Voraussetzung zur Bewertung der Viruskontamination in menschlichem Sperma. Reproduktionsbiomedizin online. doi: https://doi.org/10.1016/j.rbmo.2022.09.004. https://www.rbmojournal.com/article/S1472-6483(22)00684-8/fulltext#latedArticles.