Kakšna je učinkovitost testov RT-PCR za odkrivanje SARS-CoV-2 v človeški spermi?

Kakšna je učinkovitost testov RT-PCR za odkrivanje SARS-CoV-2 v človeški spermi?

Izbruh pandemije hudega akutnega respiratornega sindroma koronavirus 2 (SARS-CoV-2) je izpostavil zaskrbljenost glede vzorcev semena za kriobanko.

Studie: Validierung eines SARS-CoV-2 RT-PCR-Assays: eine Voraussetzung zur Bewertung der Viruskontamination in menschlichem Sperma. Bildnachweis: Leonidovich/Shutterstock

SARS-CoV-2 za vstop v ciljne celice uporablja gostiteljski receptor angiotenzinsko pretvorbo encim 2 (ACE2) in celične kofaktorje, kot je TMPRSS2. Prehodna viremija med okužbo s SARS-CoV-2 in izražanje TMPRSS2 in ACE2 v testisih in drugih pomožnih žlezah lahko vodi do izločanja SARS-CoV-2 v moškem reproduktivnem traktu.

ozadje

Čeprav razmnoževanje SARS-CoV-2 običajno ne poteka v moškem reproduktivnem sistemu, lahko nekatere specifične moške celice delujejo kot virusni rezervoar po sistemski okužbi s SARS-CoV-2.

Poleg tega lahko med zbiranjem semena pride do kontaminacije vzorcev semena s SARS-CoV-2. Možnost SARS-CoV-2 v kriokonzerviranih vzorcih semena je zaskrbljujoča pri bolnikih, ki se zdravijo s tehnologijo asistirane reprodukcije (ART) in zdravljenjem za ohranjanje plodnosti.

Do danes so štiri študije pokazale prisotnost genoma SARS-CoV-2 v vzorcih semena. Tri od teh študij so uporabile komercialne teste verižne reakcije s polimerazo (RT-PCR) za oceno vzorcev semena, medtem ko ena ni opisala mehanizma odkrivanja virusa.

Vendar so te študije vključevale majhno populacijo in niso vključevale validirane metode za odkrivanje SARS-CoV-2 v vzorcih semena. Poleg tega je večina študij uporabila komercialne teste RT-PCR, odobrene samo za respiratorne vzorce in usmerjene le na dva ali tri virusne gene.

Tri študije so za dobro detekcijo genoma SARS-CoV-2 uporabile digitalni kapljični PCR (dd-PCR). Vendar vrsta vzorca, uporabljena pri tej metodi, običajno ni bila semena. V takih študijah je za vzorce semena potrebna potrditev meje zaznavnosti (LOD).

Druga študija je uporabila »test SpermCOVID« za odkrivanje genoma SARS-CoV-2 v vzorcih dihal, ne pa tudi v vzorcih semena.

Nova študija v Reproduktivna biomedicina na spletu Namen revije je bil razviti standardiziran protokol za odkrivanje SARS-CoV-2 RNK v frakcijah semena, ki se uporabljajo za ART. To je bil visoko zmogljiv test RT-PCR, ki je za odkrivanje RNK SARS-CoV-2 uporabil vzorce sperme in kriokonzervirano semensko tekočino. Poleg tega je bila učinkovitost metode določena tudi na podlagi različnih lastnosti semena.

O študiju

Študija je vključevala zbiranje vzorcev semena pri pacientih, ki so med julijem 2020 in marcem 2021 opravili rutinsko analizo semena za neplodnost, ne glede na klinična merila, indeks telesne mase ali starost. Nobeden od bolnikov ni poročal o povišani telesni temperaturi ali drugih simptomih SARS-CoV-2. Sporočili so tudi, da niso bili izpostavljeni nikomur s simptomi SARS-CoV-2. Nato so bile izvedene konvencionalne analize semena, odkrivanje levkocitov in ocena morfologije, čemur je sledila priprava vzorca.

Normozoospermične vzorce smo odmrznili pri 4 °C in združili za analitično testiranje. Izvedena je bila ekstrakcija RNA iz 160 µl vsakega vzorca, čemur je sledilo pomnoževanje genoma SARS-CoV-2 in analitična validacija testa SARS-CoV-2 RT-PCR. Analiziran je bil vpliv kakovosti sperme na podlagi učinkovitosti RT-PCR. Na koncu je bilo opravljeno testiranje natančnosti ter LOD in meja kvantifikacije (LOQ) za test SARS-CoV-2 RT-PCR.

Rezultati

Rezultati so pokazali, da so testi natančnosti izpolnili pričakovane zahteve za vrste semen z visoko koncentracijo RNK SARS-CoV-2, za tarče virusov N in ORF1ab ter za vrste semen z nizko koncentracijo RNK SARS-CoV-2. Poleg tega so poročali, da je bil gen S najmanj občutljiva virusna tarča testa, medtem ko je bil gen N najbolj občutljiva tarča.

Ugotovljeno je bilo, da krioprotektivni medij in značilnosti semena niso vplivali na učinkovitost detekcijske metode. LOD je bil sporočen kot 0,33 kopije genoma SARS-CoV-2/µL vzorca za semensko tekočino in 0,23 kopije genoma SARS-CoV-2/µL za semenčice. Končno mora biti LOQ ena kopija virusnega genoma/µl vzorca.

Zato bi lahko s to študijo ugotovili prisotnost RNA SARS-CoV-2 v kriokonzervirani spermi in semenski tekočini. Metoda je bila učinkovita ne glede na lastnosti sperme in vrsto semena. Tako lahko ta metoda zagotovi varnost darovalcev sperme in bolnikov, ki imajo koristi od tehnik ohranjanja plodnosti med pandemijo SARS-CoV-2.

Referenca:

• Chabrolles, H. et al. (2022). Validierung eines SARS-CoV-2 RT-PCR-Assays: eine Voraussetzung zur Bewertung der Viruskontamination in menschlichem Sperma. Reproduktionsbiomedizin online. doi: https://doi.org/10.1016/j.rbmo.2022.09.004. https://www.rbmojournal.com/article/S1472-6483(22)00684-8/fulltext#latedArticles.