Suche
Mein Konto
Изследване на естествени лимфоцити убийци, транскрипционно препрограмирани от ваксиниа вирус
В проучване, публикувано наскоро на сървъра за предпечат на bioRxiv*, изследователите оценяват отговорите на естествените лимфоцити убийци (NK) на инфекции с VACV (ваксиния вирус) in vivo. Проучванията съобщават, че NK лимфоцитите играят критична роля в борбата с поксвирусните инфекции. Следователно, има нарастващ научен интерес към използването на техните възможности в базирани на поксвирус онколитични терапии и ваксинации. Въпреки това, данните за механизмите на активиране на NK клетките, рецепторите, участващи в разпознаването на VACV-инфектирани лимфоцити, и възможностите за препрограмиране на NK лимфоцити в резултат на VACV инфекции са ограничени. Обучение: Транскрипционното препрограмиране на естествени клетки убийци от вируса ваксиния показва както изразени, така и...
Изследване на естествени лимфоцити убийци, транскрипционно препрограмирани от ваксиниа вирус
В наскоро публикувано проучване bioRxiv * Сървър за предпечат, Изследователите оцениха отговорите на естествените лимфоцити убийци (NK) на инфекции с VACV (ваксиния вирус) in vivo.
Проучванията съобщават, че NK лимфоцитите играят критична роля в борбата с поксвирусните инфекции. Следователно, има нарастващ научен интерес към използването на техните възможности в базирани на поксвирус онколитични терапии и ваксинации. Въпреки това, данните за механизмите на активиране на NK клетките, рецепторите, участващи в разпознаването на VACV-инфектирани лимфоцити, и възможностите за препрограмиране на NK лимфоцити в резултат на VACV инфекции са ограничени.
Относно ученето
В настоящото проучване изследователи от университета в Кеймбридж, Обединеното кралство, и Fred Hutchinson Cancer Center, САЩ, оценяват промените в транскриптомите на NK лимфоцити при мишки, дължащи се на интраназална инфекция с щама VACV WR (Western Reserve).
След това промените бяха сравнени с идентични данни за NK лимфоцитен транскриптом от хора, инфектирани с модифицирана vaccinia Ankara (MVA) и C57BL/6 мишки, инфектирани с цитомегаловирус (mCMV). В допълнение, транскрипционните профили на NK лимфоцити бяха сравнени с изобилието на молекулата на клетъчната повърхност, определено чрез поточна цитометрия. Проведени са флуоресцентно-активиран клетъчен сортиращ анализ (FACS) и експерименти за изолиране на лимфоцити.
Рибонуклеиновата киселина (РНК), извлечена от NK лимфоцити, беше подложена на анализ на групово РНК секвениране (RNAseq). За да се оценят биологичните пътища, засегнати от VACV инфекция в NK лимфоцити, диференциално експресираните гени (DEG) между проби от VACV-инфектирани мишки и фалшиви животни бяха анализирани чрез анализ на обогатяване на генна онтология на биопроцеса.
За модела на мишка с интраназално приложение, животните бяха анестезирани и заразени с 5.0 × 103 PFU (плакообразуващи единици) от VACV WR щам за първични VACV инфекции или 105 PFU за пост-VACV ваксинация или с контролни инжекции. За модела на интрадермално приложена миша инфекция, животните бяха инфектирани интрадермално с 10³ PFU от щама VACV WR. Освен това бяха проведени анализи на плаки за потвърждаване на VACV титри в BSC-1 клетки (клетъчна линия на африканска зелена маймуна).
Двадесет и осем дни след интрадермалната VACV инфекция, проби от кръв и далак са взети от мишки. Тъканите на далака бяха използвани за изолиране на NK или клъстер от диференциация 8+ (CD8+) Т лимфоцити. Опашките на миши реципиенти се инжектират интравенозно с NK лимфоцити, CD8+ Т лимфоцити или суспензии от спленоцити и мишките се заразяват след 1 ден интраназално с 105 PFU от VACV WR. Животните се претеглят редовно и се наблюдават за признаци на заболяване до 14 дни след излагане на VACV.
Резултати
Широки промени в активността на NK лимфоцитни транскрипти са наблюдавани при VACV-инфектирани мишки, в съответствие с директното разпознаване на целевите клетки и експозицията на цитокини и интерферони. В допълнение, екипът отбеляза промени в експресията на някои NKRs (повърхностни NK рецептори), като: B. рецепторите от семейството SLAM и Ly49 и свързаната с паметта регулация на NK маркера. Адоптивният трансфер на NK клетки на паметта не осигурява имунна защита срещу повторно заразяване. Сравнението на резултатите с отговорите на NK лимфоцити към инфекции с миши цитомегаловирус (mCMV) разкрива общи черти и различна VACV-индуцирана NK транскрипционна активност. Наблюдава се припокриване между NK транскрипционните отговори при хора, на които са прилагани атенюирани VACV ваксини и MVA, което предполага запазени NK лимфоцитни отговори при различни гостоприемници. VACV-индуцирано активиране, разширяване и съзряване на NK лимфоцити със съпътстващи промени в програмите за масова транскрипция и експресия на маркери на паметта.
Броят на NK клетките се увеличава на 6,5 дни след инфекцията (dpi) и се наблюдава преференциално разширяване на подгрупите CD27+CD11b- и CD27+CD11b+. DEG (диференциално експресирани гени) анализ между VACV-инфектирани и фалшиви проби при 1,5 dpi и 6,5 dpi, съответно, показа 70 транскрипта и 3280 транскрипта със значителни промени. Сравнението на двойки инфектирани с VAC проби и фалшиви проби разкри съответно 4045 и 140 значително променени транскрипта.
DEG при инфектирани с VACV миши животни при 1,5 dpi не могат да бъдат разграничени от фоновия шум, докато тези, идентифицирани при заразени животни при 6,5 dpi, се различават биологично в техните отговори на VACV инфекция. NK лимфоцитите ангажират ефекторни пътища и показват активни защитни фенотипове в резултат на VACV инфекции. NK лимфоцитите разпознават не само анормални модели на експресия на протеини на повърхността на VACV-инфектирани клетки in vivo, но също и интерфероните и цитокините, участващи в активирането на NK лимфоцитите.
Повишаване на експресията на Ly108 d CD319 се наблюдава в NK лимфоцити в отговор на VACV инфекция. Рецепторите най-вероятно медиират функцията на NK активиране чрез едновременна експресия с NK-активиращи адаптерни молекули. По време на остри инфекции с VACV, NK лимфоцитите на далака показват значителна регулация на свързаните с паметта маркери на NK лимфоцити.
Миши и човешки NK лимфоцити споделят транскриптомна сигнатура в отговор на VACV инфекция или ваксинация, която е значително свързана с директната идентификация на VACV-инфектирани клетъчни популации. NKR транскрипти като tigit, gbp49a/b, klrg1, cd69, crtam, lag3, thy1, klrb1b, cd160 и lair1 бяха значително регулирани нагоре, докато klra9 и klrc2 бяха значително понижени.
Като цяло, резултатите от проучването предоставиха нова информация за активирането, функциите и хомеостазата на NK лимфоцитите по време на VACV инфекции, което може да има отражение върху разработването на VACV-базирани терапевтици. Сравнение с NK транскрипционните отговори на MVA ваксинации при хора и отговора на различни вируси, включително mCMV, разкрива запазени характеристики на NK транскрипционно препрограмиране във връзка с инфекция или ваксинация.
*Важна ЗАБЕЛЕЖКА
bioRxiv публикува предварителни научни доклади, които не са били рецензирани и следователно не трябва да се считат за убедителни, да насочват клиничната практика/здравното поведение или да се третират като установена информация.
Справка:
- Die transkriptionelle Reprogrammierung natürlicher Killerzellen durch das Vacciniavirus zeigt bei mCMV sowohl ausgeprägte als auch konservierte Merkmale. Delphine M. Depierreux, Geoffrey L. Smith, Brian J. Ferguson. bioRxiv Preprint 2022, DOI: https://doi.org/10.1101/2022.11.10.516015, https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2022.11.10.516015v1
.