Výzkumníci vyvinuli test pro kvalitativní hodnocení neutralizačních protilátek SARS-CoV-2

Výzkumníci vyvinuli test pro kvalitativní hodnocení neutralizačních protilátek SARS-CoV-2

Rozsáhlé testování na infekci koronavirem 2 (SARS-CoV-2) těžkého akutního respiračního syndromu bylo primárním opatřením k omezení probíhající pandemie. Infekce způsobuje koronavirové onemocnění 2019 (COVID-19), které si dosud celosvětově vyžádalo přes 2,7 milionu životů. Potřeba účinných terapeutických řešení je velká, také vzhledem k probíhajícím očkovacím programům proti SARS-CoV-2 v mnoha částech světa. Jedním z takových terapeutických přístupů na bázi plazmy je použití neutralizačních protilátek z krve pacientů v rekonvalescenci.

Aby se vyřešila potřeba vysoce kvalitního neutralizačního testu proti SARS-CoV-2, vědci z Národního institutu pro alergie a infekční nemoci (NIAID) upravili a optimalizovali dříve zavedený test neutralizace snížení fluorescence (FRNA), aby umožnili kvalitativní hodnocení velkého počtu infikovaných buněk pomocí zobrazovacího systému s vysokým obsahem.

V této studii tým popsal semi-vysokopropustný, vysoce kvantitativní neutralizační test pro SARS-CoV-2 založený na zobrazovacím systému Operetta s vysokým obsahem. Autoři tvrdili, že podobná zařízení (která nemusí být k dispozici v mnoha laboratorních prostředích) by mohla být stejně účinná s vhodnou validací.

Uvedli, že od února 2021 byla SARS-CoV-2 FRNA použita ke screeningu více než 5 000 vzorků, včetně akutních a rekonvalescentních vzorků plazmy nebo séra a terapeutických protilátkových ošetření, na neutralizační titry SARS-CoV-2.

"I když bude vždy existovat variabilita v testech živých virů kvůli povaze biologického systému, použití přísného statistického přístupu k informování o přijatelnosti dat může zmírnit potenciální negativní účinky špatné účinnosti infekce, chyb při pipetování, okrajových efektů a nekonzistentního barvení."

COVID-19 je heterogenní onemocnění, které se často projevuje jako závažná onemocnění dýchacích cest, kardiovaskulární onemocnění a neurologická onemocnění. Během akutního onemocnění dochází k rychlé změně třídy protilátek z imunoglobulinu M (IgM) na IgG a IgA. Vědci poznamenávají, že izotyp protilátky je pro kontrolu onemocnění stejně důležitý jako virový cílový protein.

Výzkumníci pozorovali, že závažnost onemocnění je spojena s robustnějšími a dlouhodobějšími protilátkovými odpověďmi na virový nukleoprotein (N). Proto se má za to, že přítomnost protilátek proti SARS-CoV-2 v krvi je dobrým měřítkem ochranné imunity kandidáta na vakcínu. To vyžaduje rychlé metody, které jsou spolehlivé a citlivé k detekci neutralizačních protilátek SARS-CoV-2.

Imunofluorescenční barvení buněk infikovaných SARS-CoV-2.A. Neinfikované buňky obarvené jaderným barvivem Hoechst (modré). B. Buňky infikované SARS-CoV-2 a vyšetřené protilátkou specifickou pro protein SARS-CoV N a sekundární protilátkou Alexa594 (červená). Buňky byly kontrastně obarveny jaderným barvivem Hoechst (modré).

Tento zpravodajský článek byl recenzí předběžné vědecké zprávy, která nebyla v době publikace recenzována. Od svého prvního zveřejnění byla vědecká zpráva nyní recenzována a přijata k publikaci v akademickém časopise. Odkazy na předběžné a recenzované zprávy naleznete v části Zdroje na konci tohoto článku.Zobrazit zdroje

FRNA je vysoce specifický, kvantifikovatelný a přísný test pro hodnocení neutralizačních protilátek v testovaném vzorku. Test kvantifikuje jednotlivé buňky infikované počátečním přidáním viru a nevyžaduje více kol replikace viru.

Jako atypický test se nespoléhá na subjektivní stanovení buněčných cytopatických účinků ani na vývoj mnohobuněčných plaků nebo imunitních ložisek s použitím malého počtu infekčních částic na jamku. Výzkumníci zkoumali pozorování kontroly viru a kontroly buněk na odlehlé hodnoty a hodnotili variabilitu a specifičnost testu.

Protože test používá 12-kroková schémata ředění a čtyřparametrovou logistickou analýzu ke kvantifikaci specifického NT50, umožňuje přesnější pochopení neutralizační kapacity, zejména v případě monoklonálních protilátek nebo nanoprotilátek.

V této studii výzkumníci popsali vývoj semi-vysokopropustného neutralizačního testu SARS-CoV-2, který využívá schopnosti zobrazovacího systému s vysokým obsahem ke kvantifikaci počtu infikovaných buněk v jednotlivých jamkách. Důležité je, že vědci ukázali, že test lze rychle přizpůsobit pro použití s ​​více variantami virů. Takové testy nesmírně pomáhají a urychlují předklinické studie vakcín a klinické studie.

Během krize COVID-19 americký Úřad pro kontrolu potravin a léčiv (FDA) původně schválil program rozšířeného přístupu (EAP) k léčbě pacientů s COVID-19 plazmou od jedinců s neutralizačním titrem 1:160 nebo vyšším. Tento program ošetřil více než 94 000 pacientů po celých Spojených státech. Loni v srpnu vydala FDA povolení k nouzovému použití (EUA), které umožňuje terapeutickou plazmatickou léčbu pacientů s COVID-19 mimo klinické studie.

Vědci tvrdí, že tento test nevyžaduje subjektivní interpretaci, a je tedy přesnější než většina ostatních testů na neutralizaci virů divokého typu.

"Ačkoli vždy bude existovat variabilita v testech živých virů kvůli povaze biologického systému, použití přísného statistického přístupu k informovanému přijímání dat může zmírnit potenciální negativní účinky špatné účinnosti infekce, chyb při pipetování, okrajových efektů a nekonzistentních skvrn."

Tento zpravodajský článek byl recenzí předběžné vědecké zprávy, která nebyla v době publikace recenzována. Od svého prvního zveřejnění byla vědecká zpráva nyní recenzována a přijata k publikaci v akademickém časopise. Odkazy na předběžné a recenzované zprávy naleznete v části Zdroje na konci tohoto článku.Zobrazit zdroje

Revize článku

• 5. April 2023 – Die vorab gedruckte vorläufige Forschungsarbeit, auf der dieser Artikel basiert, wurde zur Veröffentlichung in einer von Experten begutachteten wissenschaftlichen Zeitschrift angenommen. Dieser Artikel wurde entsprechend bearbeitet und enthält nun einen Link zum endgültigen, von Experten begutachteten Artikel, der jetzt im Abschnitt „Quellen“ angezeigt wird.

Zdroje: