Οι ερευνητές αναπτύσσουν ανάλυση για την ποιοτική αξιολόγηση των εξουδετερωτικών αντισωμάτων SARS-CoV-2

Οι ερευνητές αναπτύσσουν ανάλυση για την ποιοτική αξιολόγηση των εξουδετερωτικών αντισωμάτων SARS-CoV-2

Οι εκτενείς δοκιμές για σοβαρό οξύ αναπνευστικό σύνδρομο λοίμωξη από κορωνοϊό 2 (SARS-CoV-2) ήταν ένα πρωταρχικό μέτρο περιορισμού για τον περιορισμό της συνεχιζόμενης πανδημίας. Η μόλυνση προκαλεί τη νόσο του κορωνοϊού 2019 (COVID-19), η οποία μέχρι στιγμής έχει στοιχίσει πάνω από 2,7 εκατομμύρια ζωές παγκοσμίως. Η ανάγκη για αποτελεσματικές θεραπευτικές λύσεις είναι μεγάλη, δεδομένων και των συνεχιζόμενων προγραμμάτων εμβολιασμού κατά του SARS-CoV-2 σε πολλά μέρη του κόσμου. Μια τέτοια θεραπευτική προσέγγιση με βάση το πλάσμα είναι η χρήση εξουδετερωτικών αντισωμάτων από το αίμα ασθενών που βρίσκονται σε ανάρρωση.

Για να αντιμετωπίσουν την ανάγκη για ένα τεστ εξουδετέρωσης υψηλής ποιότητας κατά του SARS-CoV-2, ερευνητές στο Εθνικό Ινστιτούτο Αλλεργίας και Λοιμωδών Νοσημάτων (NIAID) τροποποίησαν και βελτιστοποίησαν ένα προηγουμένως καθιερωμένο τεστ εξουδετέρωσης μείωσης φθορισμού (FRNA) για να επιτρέψει την ποιοτική αξιολόγηση μεγάλου αριθμού μολυσμένων κυττάρων μέσω της χρήσης ενός συστήματος απεικόνισης υψηλού περιεχομένου.

Σε αυτή τη μελέτη, η ομάδα περιέγραψε μια δοκιμασία ημι-υψηλής απόδοσης, υψηλής ποσοτικής εξουδετέρωσης για τον SARS-CoV-2 με βάση το σύστημα απεικόνισης υψηλού περιεχομένου Operetta. Οι συγγραφείς ισχυρίστηκαν ότι παρόμοιες συσκευές (οι οποίες μπορεί να μην είναι διαθέσιμες σε πολλές εργαστηριακές ρυθμίσεις) θα μπορούσαν να είναι εξίσου αποτελεσματικές με την κατάλληλη επικύρωση.

Ανέφεραν ότι από τον Φεβρουάριο του 2021, το FRNA του SARS-CoV-2 είχε χρησιμοποιηθεί για τον έλεγχο πάνω από 5.000 δειγμάτων, συμπεριλαμβανομένων δειγμάτων πλάσματος ή ορού οξείας και ανάρρωσης και θεραπευτικών θεραπειών με αντισώματα, για τίτλους εξουδετέρωσης του SARS-CoV-2.

"Ενώ θα υπάρχει πάντα μεταβλητότητα στις αναλύσεις ζωντανών ιών λόγω της φύσης του βιολογικού συστήματος, η χρήση μιας αυστηρής στατιστικής προσέγγισης για την ενημέρωση της αποδοχής των δεδομένων μπορεί να μετριάσει τις πιθανές αρνητικές επιπτώσεις της κακής απόδοσης μόλυνσης, των σφαλμάτων με πιπέτα, των επιδράσεων των άκρων και της ασυνεπούς χρώσης."

Το COVID-19 είναι μια ετερογενής νόσος που συχνά εκδηλώνεται ως σοβαρές παθήσεις του αναπνευστικού, καρδιαγγειακές παθήσεις και νευρολογικές παθήσεις. Κατά τη διάρκεια μιας οξείας ασθένειας υπάρχει μια ταχεία αλλαγή στην κατηγορία αντισωμάτων από ανοσοσφαιρίνη M (IgM) σε IgG και IgA. Οι ερευνητές σημειώνουν ότι ο ισότυπος αντισώματος είναι εξίσου σημαντικός για τον έλεγχο της νόσου με την ιική πρωτεΐνη-στόχο.

Οι ερευνητές παρατήρησαν ότι η σοβαρότητα της νόσου σχετίζεται με πιο ισχυρές και πιο μακροχρόνιες αποκρίσεις αντισωμάτων στην ιική νουκλεοπρωτεΐνη (Ν). Επομένως, η παρουσία αντισωμάτων κατά του SARS-CoV-2 στο αίμα πιστεύεται ότι αποτελεί καλό μέτρο της προστατευτικής ανοσίας ενός υποψήφιου εμβολίου. Αυτό απαιτεί γρήγορες μεθόδους που είναι αξιόπιστες και ευαίσθητες για την ανίχνευση αντισωμάτων εξουδετέρωσης του SARS-CoV-2.

Χρώση ανοσοφθορισμού κυττάρων μολυσμένων με SARS-CoV-2.Α. Μη μολυσμένα κύτταρα χρωματισμένα με πυρηνική χρώση Hoechst (μπλε). Β. Κύτταρα που μολύνθηκαν με SARS-CoV-2 και εξετάστηκαν με ένα ειδικό για την πρωτεΐνη SARS-CoV αντίσωμα και ένα δευτερεύον αντίσωμα Alexa594 (κόκκινο). Τα κύτταρα αντιχρωματίστηκαν με πυρηνική χρώση Hoechst (μπλε).

Αυτό το άρθρο ειδήσεων ήταν μια ανασκόπηση μιας προκαταρκτικής επιστημονικής έκθεσης που δεν είχε αξιολογηθεί από ομοτίμους κατά τη στιγμή της δημοσίευσης. Από την αρχική της δημοσίευση, η επιστημονική έκθεση έχει πλέον αξιολογηθεί από ομοτίμους και έγινε αποδεκτή για δημοσίευση σε ακαδημαϊκό περιοδικό. Μπορείτε να βρείτε συνδέσμους για τις προκαταρκτικές αναφορές και τις αναφορές με αξιολόγηση από ομοτίμους στην ενότητα Πηγές στο τέλος αυτού του άρθρου.Προβολή πηγών

Το FRNA είναι ένα εξαιρετικά ειδικό, ποσοτικοποιήσιμο και αυστηρό τεστ για την αξιολόγηση των εξουδετερωτικών αντισωμάτων σε ένα δείγμα δοκιμής. Η ανάλυση ποσοτικοποιεί μεμονωμένα κύτταρα που έχουν μολυνθεί με την αρχική προσθήκη ιού και δεν απαιτεί πολλαπλούς γύρους αντιγραφής ιού.

Ως άτυπη δοκιμή, δεν βασίζεται στον υποκειμενικό προσδιορισμό των κυτταροπαθητικών επιδράσεων των κυττάρων ούτε στην ανάπτυξη πολυκυτταρικών πλακών ή ανοσοποιητικών εστιών χρησιμοποιώντας μικρούς αριθμούς μολυσματικών σωματιδίων ανά φρεάτιο. Οι ερευνητές εξέτασαν τις παρατηρήσεις ελέγχου ιού και κυτταρικού ελέγχου για ακραίες τιμές και αξιολόγησαν τη μεταβλητότητα και την ειδικότητα της ανάλυσης.

Επειδή η ανάλυση χρησιμοποιεί σχήματα αραίωσης 12 σταδίων και λογιστική ανάλυση τεσσάρων παραμέτρων για να ποσοτικοποιήσει ένα συγκεκριμένο NT50, επιτρέπει την ακριβέστερη κατανόηση της ικανότητας εξουδετέρωσης, ιδιαίτερα στην περίπτωση των μονοκλωνικών αντισωμάτων ή των νανοσωμάτων.

Σε αυτή τη μελέτη, οι ερευνητές περιέγραψαν την ανάπτυξη μιας δοκιμασίας εξουδετέρωσης SARS-CoV-2 ημι-υψηλής απόδοσης που αξιοποιεί τις δυνατότητες ενός συστήματος απεικόνισης υψηλού περιεχομένου για να ποσοτικοποιήσει τον αριθμό των μολυσμένων κυττάρων σε μεμονωμένα φρεάτια. Είναι σημαντικό ότι οι ερευνητές έδειξαν ότι το τεστ θα μπορούσε να προσαρμοστεί γρήγορα για χρήση με πολλαπλές παραλλαγές ιού. Τέτοιες δοκιμές βοηθούν πάρα πολύ και επιταχύνουν τις προκλινικές μελέτες εμβολίων και τις κλινικές δοκιμές.

Κατά τη διάρκεια της κρίσης του COVID-19, ο Οργανισμός Τροφίμων και Φαρμάκων των ΗΠΑ (FDA) ενέκρινε αρχικά ένα Πρόγραμμα Διευρυμένης Πρόσβασης (EAP) για τη θεραπεία ασθενών με COVID-19 με πλάσμα από άτομα με τίτλο εξουδετέρωσης 1:160 ή μεγαλύτερο. Αυτό το πρόγραμμα έχει περιθάλψει περισσότερους από 94.000 ασθενείς σε όλες τις Ηνωμένες Πολιτείες. Τον περασμένο Αύγουστο, η FDA εξέδωσε μια Άδεια Χρήσης Έκτακτης Ανάγκης (EUA) για να επιτρέψει τη θεραπευτική θεραπεία με πλάσμα ασθενών με COVID-19 εκτός κλινικών δοκιμών.

Οι ερευνητές ισχυρίζονται ότι αυτό το τεστ δεν απαιτεί υποκειμενική ερμηνεία και ως εκ τούτου είναι πιο ακριβές από τα περισσότερα τεστ για την εξουδετέρωση ιών άγριου τύπου.

«Αν και θα υπάρχει πάντα διακύμανση στις αναλύσεις ζωντανών ιών λόγω της φύσης του βιολογικού συστήματος, η χρήση μιας αυστηρής στατιστικής προσέγγισης για την ενημέρωση της αποδοχής των δεδομένων μπορεί να μετριάσει τις πιθανές αρνητικές επιπτώσεις της κακής απόδοσης μόλυνσης, των σφαλμάτων με πιπέτα, των επιδράσεων των άκρων και των λεκέδων ασυνέπειας».

Αυτό το άρθρο ειδήσεων ήταν μια ανασκόπηση μιας προκαταρκτικής επιστημονικής έκθεσης που δεν είχε αξιολογηθεί από ομοτίμους κατά τη στιγμή της δημοσίευσης. Από την αρχική της δημοσίευση, η επιστημονική έκθεση έχει πλέον αξιολογηθεί από ομοτίμους και έγινε αποδεκτή για δημοσίευση σε ακαδημαϊκό περιοδικό. Μπορείτε να βρείτε συνδέσμους για τις προκαταρκτικές αναφορές και τις αναφορές με αξιολόγηση από ομοτίμους στην ενότητα Πηγές στο τέλος αυτού του άρθρου.Προβολή πηγών

Αναθεωρήσεις άρθρου

• 5. April 2023 – Die vorab gedruckte vorläufige Forschungsarbeit, auf der dieser Artikel basiert, wurde zur Veröffentlichung in einer von Experten begutachteten wissenschaftlichen Zeitschrift angenommen. Dieser Artikel wurde entsprechend bearbeitet und enthält nun einen Link zum endgültigen, von Experten begutachteten Artikel, der jetzt im Abschnitt „Quellen“ angezeigt wird.

Πηγές: