Los investigadores desarrollan un ensayo para la evaluación cualitativa de los anticuerpos neutralizantes del SARS-CoV-2

Los investigadores desarrollan un ensayo para la evaluación cualitativa de los anticuerpos neutralizantes del SARS-CoV-2

Las pruebas exhaustivas para detectar la infección por coronavirus 2 (SARS-CoV-2) de la neumonía asiática han sido una medida de contención primaria para contener la pandemia en curso. La infección causa la enfermedad por coronavirus 2019 (COVID-19), que hasta ahora se ha cobrado más de 2,7 millones de vidas en todo el mundo. La necesidad de soluciones terapéuticas eficaces es grande, teniendo en cuenta también los programas de vacunación en curso contra el SARS-CoV-2 en muchas partes del mundo. Uno de esos enfoques terapéuticos basados ​​en plasma es el uso de anticuerpos neutralizantes de la sangre de pacientes convalecientes.

Para abordar la necesidad de una prueba de neutralización de alta calidad contra el SARS-CoV-2, investigadores del Instituto Nacional de Alergias y Enfermedades Infecciosas (NIAID) modificaron y optimizaron una prueba de neutralización por reducción de fluorescencia (FRNA) previamente establecida para permitir la evaluación cualitativa de una gran cantidad de células infectadas mediante el uso de un sistema de imágenes de alto contenido.

En este estudio, el equipo describió un ensayo de neutralización altamente cuantitativo y de rendimiento semialto para el SARS-CoV-2 basado en el sistema de imágenes de alto contenido Operetta. Los autores afirmaron que dispositivos similares (que pueden no estar disponibles en muchos laboratorios) podrían ser igualmente efectivos con una validación adecuada.

Informaron que, hasta febrero de 2021, se había utilizado FRNA del SARS-CoV-2 para detectar más de 5.000 muestras, incluidas muestras de plasma o suero de casos agudos y convalecientes y tratamientos terapéuticos con anticuerpos, para detectar títulos neutralizantes del SARS-CoV-2.

"Si bien siempre habrá variabilidad en los ensayos de virus vivos debido a la naturaleza del sistema biológico, el uso de un enfoque estadístico riguroso para informar la aceptabilidad de los datos puede mitigar los posibles efectos negativos de una pobre eficiencia de infección, errores de pipeteo, efectos de borde y tinciones inconsistentes".

La COVID-19 es una enfermedad heterogénea que a menudo se manifiesta como enfermedades respiratorias graves, enfermedades cardiovasculares y enfermedades neurológicas. Durante una enfermedad aguda hay un cambio rápido en la clase de anticuerpos de inmunoglobulina M (IgM) a IgG e IgA. Los investigadores señalan que el isotipo del anticuerpo es tan importante para controlar la enfermedad como la proteína diana viral.

Los investigadores observaron que la gravedad de la enfermedad se asocia con respuestas de anticuerpos más sólidas y duraderas a la nucleoproteína viral (N). Por lo tanto, se cree que la presencia de anticuerpos anti-SARS-CoV-2 en la sangre es una buena medida de la inmunidad protectora de una vacuna candidata. Esto requiere métodos rápidos, fiables y sensibles para detectar anticuerpos neutralizantes del SARS-CoV-2.

Tinción de inmunofluorescencia de células infectadas por SARS-CoV-2.A. Células no infectadas teñidas con tinción nuclear de Hoechst (azul). B. Células infectadas con SARS-CoV-2 y examinadas con un anticuerpo específico de la proteína N del SARS-CoV y un anticuerpo secundario Alexa594 (rojo). Las células se tiñeron con tinción nuclear de Hoechst (azul).

Este artículo de noticias fue una revisión de un informe científico preliminar que no había sido revisado por pares en el momento de su publicación. Desde su publicación inicial, el informe científico ha sido revisado por pares y aceptado para su publicación en una revista académica. Los enlaces a los informes preliminares y revisados ​​por pares se pueden encontrar en la sección Fuentes al final de este artículo.Ver fuentes

El FRNA es una prueba altamente específica, cuantificable y rigurosa para evaluar anticuerpos neutralizantes en una muestra de prueba. El ensayo cuantifica células individuales infectadas con la adición inicial de virus y no requiere múltiples rondas de replicación del virus.

Como prueba atípica, no se basa en la determinación subjetiva de los efectos citopáticos de las células ni en el desarrollo de placas multicelulares o focos inmunes utilizando pequeñas cantidades de partículas infecciosas por pocillo. Los investigadores examinaron las observaciones del control del virus y del control celular en busca de valores atípicos y evaluaron la variabilidad y especificidad del ensayo.

Debido a que el ensayo utiliza esquemas de dilución de 12 pasos y análisis logístico de cuatro parámetros para cuantificar un NT50 específico, permite una comprensión más precisa de la capacidad de neutralización, particularmente en el caso de anticuerpos o nanocuerpos monoclonales.

En este estudio, los investigadores describieron el desarrollo de un ensayo de neutralización del SARS-CoV-2 de rendimiento semialto que aprovecha las capacidades de un sistema de imágenes de alto contenido para cuantificar la cantidad de células infectadas en pocillos individuales. Es importante destacar que los investigadores demostraron que la prueba podría adaptarse rápidamente para su uso con múltiples variantes de virus. Estas pruebas ayudan enormemente y aceleran los estudios preclínicos de vacunas y los ensayos clínicos.

Durante la crisis de COVID-19, la Administración de Medicamentos y Alimentos de EE. UU. (FDA) aprobó inicialmente un Programa de Acceso Ampliado (EAP) para tratar a pacientes con COVID-19 con plasma de individuos con un título de neutralización de 1:160 o superior. Este programa ha tratado a más de 94.000 pacientes en todo Estados Unidos. En agosto pasado, la FDA emitió una Autorización de uso de emergencia (EUA) para permitir el tratamiento terapéutico con plasma de pacientes con COVID-19 fuera de los ensayos clínicos.

Los investigadores afirman que esta prueba no requiere interpretación subjetiva y, por lo tanto, es más precisa que la mayoría de las otras pruebas para neutralizar virus de tipo salvaje.

"Aunque siempre habrá variabilidad en los ensayos de virus vivos debido a la naturaleza del sistema biológico, el uso de un enfoque estadístico riguroso para informar la aceptación de los datos puede mitigar los posibles efectos negativos de una mala eficiencia de la infección, errores de pipeteo, efectos de borde y manchas de inconsistencia".

Este artículo de noticias fue una revisión de un informe científico preliminar que no había sido revisado por pares en el momento de su publicación. Desde su publicación inicial, el informe científico ha sido revisado por pares y aceptado para su publicación en una revista académica. Los enlaces a los informes preliminares y revisados ​​por pares se pueden encontrar en la sección Fuentes al final de este artículo.Ver fuentes

Revisiones de artículos

• 5. April 2023 – Die vorab gedruckte vorläufige Forschungsarbeit, auf der dieser Artikel basiert, wurde zur Veröffentlichung in einer von Experten begutachteten wissenschaftlichen Zeitschrift angenommen. Dieser Artikel wurde entsprechend bearbeitet und enthält nun einen Link zum endgültigen, von Experten begutachteten Artikel, der jetzt im Abschnitt „Quellen“ angezeigt wird.

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