Teadlased töötavad välja analüüsi SARS-CoV-2 neutraliseerivate antikehade kvalitatiivseks hindamiseks

Teadlased töötavad välja analüüsi SARS-CoV-2 neutraliseerivate antikehade kvalitatiivseks hindamiseks

Raske ägeda respiratoorse sündroomi koroonaviirus 2 (SARS-CoV-2) nakkuse ulatuslik testimine on olnud peamine tõkestamismeede käimasoleva pandeemia ohjeldamiseks. Nakkus põhjustab 2019. aasta koroonaviirushaigust (COVID-19), mis on maailmas seni nõudnud üle 2,7 miljoni inimelu. Vajadus tõhusate ravilahenduste järele on suur, arvestades ka mitmel pool maailmas käimasolevaid vaktsineerimisprogramme SARS-CoV-2 vastu. Üks selline plasmapõhine ravimeetod on neutraliseerivate antikehade kasutamine taastuvate patsientide verest.

Et rahuldada SARS-CoV-2 vastase kvaliteetse neutraliseerimistesti vajadust, muutsid ja optimeerisid riikliku allergia- ja nakkushaiguste instituudi (NIAID) teadlased varem loodud fluorestsentsi vähendamise neutraliseerimise (FRNA) testi, et võimaldada suure hulga nakatunud rakkude kvalitatiivset hindamist suure sisuga pildisüsteemi abil.

Selles uuringus kirjeldas meeskond SARS-CoV-2 poolkõrge läbilaskevõimega väga kvantitatiivset neutraliseerimisanalüüsi, mis põhines suure sisaldusega Operetta pildistamissüsteemil. Autorid väitsid, et sarnased seadmed (mis ei pruugi paljudes laboriseadetes saadaval olla) võivad olla asjakohase valideerimisega võrdselt tõhusad.

Nad teatasid, et 2021. aasta veebruari seisuga oli SARS-CoV-2 FRNA-d kasutatud enam kui 5000 proovi, sealhulgas ägedate ja taastuvate plasma- või seerumiproovide ning terapeutiliste antikehade kontrollimiseks SARS-CoV-2 neutraliseerivate tiitrite tuvastamiseks.

"Kuigi elusviiruse analüüsides on bioloogilise süsteemi olemuse tõttu alati varieeruvus, võib andmete vastuvõetavuse teavitamiseks range statistilise lähenemisviisi kasutamine leevendada nakkuse halva tõhususe, pipeteerimisvigade, servaefektide ja ebajärjekindla värvimise võimalikke negatiivseid mõjusid."

COVID-19 on heterogeenne haigus, mis avaldub sageli raskete hingamisteede haiguste, südame-veresoonkonna haiguste ja neuroloogiliste haigustena. Ägeda haiguse ajal toimub antikehade klassi kiire muutus immunoglobuliinilt M (IgM) IgG-le ja IgA-le. Teadlased märgivad, et antikeha isotüüp on haiguse kontrolli all hoidmisel sama oluline kui viiruse sihtvalk.

Teadlased täheldasid, et haiguse raskusaste on seotud tugevamate ja kauem kestvate antikehade vastustega viiruse nukleoproteiinile (N). Seetõttu arvatakse, et SARS-CoV-2-vastaste antikehade olemasolu veres on vaktsiinikandidaadi kaitsva immuunsuse hea näitaja. Selleks on vaja kiireid meetodeid, mis on usaldusväärsed ja tundlikud SARS-CoV-2 neutraliseerivate antikehade tuvastamiseks.

SARS-CoV-2-ga nakatunud rakkude immunofluorestsentsvärvimine.A. Hoechsti tuumavärviga (sinine) värvitud nakatamata rakud. B. SARS-CoV-2-ga nakatatud rakud, mida uuriti SARS-CoV N-valguspetsiifilise antikeha ja Alexa594 sekundaarse antikehaga (punane). Rakud värviti vastu Hoechsti tuumavärviga (sinine).

See uudisartikkel oli ülevaade esialgsest teaduslikust aruandest, mida avaldamise ajal ei olnud eelretsenseeritud. Alates selle esialgsest avaldamisest on teaduslikku aruannet nüüdseks eelretsenseeritud ja aktsepteeritud akadeemilises ajakirjas avaldamiseks. Lingid esialgsetele ja eelretsenseeritud aruannetele leiate selle artikli lõpus olevast jaotisest Allikad.Vaata allikaid

FRNA on väga spetsiifiline, kvantifitseeritav ja range test neutraliseerivate antikehade hindamiseks uuritavas proovis. Analüüs määrab kindlaks üksikud rakud, mis on nakatunud viiruse esialgse lisamisega, ja ei nõua mitut viiruse replikatsiooni ringi.

Ebatüüpilise testina ei tugine see raku tsütopaatiliste mõjude subjektiivsele määramisele ega mitmerakuliste naastude või immuunkollete tekkele, kasutades väikese arvu nakkuslikke osakesi süvendi kohta. Teadlased uurisid viirusetõrje ja rakukontrolli vaatlusi kõrvalekallete osas ning hindasid analüüsi varieeruvust ja spetsiifilisust.

Kuna analüüs kasutab spetsiifilise NT50 kvantifitseerimiseks 12-astmelist lahjendusskeemi ja neljaparameetrilist logistilist analüüsi, võimaldab see neutraliseerimisvõimet täpsemalt mõista, eriti monoklonaalsete antikehade või nanokehade puhul.

Selles uuringus kirjeldasid teadlased pooleldi suure läbilaskevõimega SARS-CoV-2 neutraliseerimistesti väljatöötamist, mis kasutab suure sisaldusega pildistamissüsteemi võimalusi nakatunud rakkude arvu kvantifitseerimiseks üksikutes süvendites. Oluline on see, et teadlased näitasid, et testi saab kiiresti kohandada kasutamiseks mitme viirusevariandiga. Sellised testid aitavad tohutult ja kiirendavad prekliinilisi vaktsiiniuuringuid ja kliinilisi uuringuid.

COVID-19 kriisi ajal kiitis USA Toidu- ja Ravimiamet (FDA) esialgu heaks laiendatud juurdepääsuprogrammi (EAP), et ravida COVID-19 patsiente plasmaga, mille neutraliseerimistiiter on 1:160 või kõrgem. See programm on ravinud üle 94 000 patsiendi kogu Ameerika Ühendriikides. Möödunud aasta augustis andis FDA välja erakorralise kasutamise loa (EUA), mis lubab COVID-19 patsientide plasmaravi väljaspool kliinilisi uuringuid.

Teadlased väidavad, et see test ei vaja subjektiivset tõlgendust ja on seetõttu täpsem kui enamik teisi metsiktüüpi viiruste neutraliseerimise teste.

"Kuigi elusviiruse testid on bioloogilise süsteemi olemuse tõttu alati varieeruvad, võib range statistilise lähenemisviisi kasutamine andmete vastuvõtmise teavitamiseks leevendada halva nakkustõhususe, pipeteerimisvigade, servaefektide ja ebaühtluse plekkide võimalikke negatiivseid mõjusid."

See uudisartikkel oli ülevaade esialgsest teaduslikust aruandest, mida avaldamise ajal ei olnud eelretsenseeritud. Alates selle esialgsest avaldamisest on teaduslikku aruannet nüüdseks eelretsenseeritud ja aktsepteeritud akadeemilises ajakirjas avaldamiseks. Lingid esialgsetele ja eelretsenseeritud aruannetele leiate selle artikli lõpus olevast jaotisest Allikad.Vaata allikaid

Artiklite redaktsioonid

• 5. April 2023 – Die vorab gedruckte vorläufige Forschungsarbeit, auf der dieser Artikel basiert, wurde zur Veröffentlichung in einer von Experten begutachteten wissenschaftlichen Zeitschrift angenommen. Dieser Artikel wurde entsprechend bearbeitet und enthält nun einen Link zum endgültigen, von Experten begutachteten Artikel, der jetzt im Abschnitt „Quellen“ angezeigt wird.

Allikad: