Les chercheurs développent un test pour l’évaluation qualitative des anticorps neutralisants du SRAS-CoV-2

Les chercheurs développent un test pour l’évaluation qualitative des anticorps neutralisants du SRAS-CoV-2

Des tests approfondis pour l’infection par le coronavirus 2 du syndrome respiratoire aigu sévère (SRAS-CoV-2) ont été une mesure de confinement principale pour contenir la pandémie en cours. L’infection provoque la maladie à coronavirus 2019 (COVID-19), qui a jusqu’à présent fait plus de 2,7 millions de morts dans le monde. Le besoin de solutions thérapeutiques efficaces est grand, compte tenu également des programmes de vaccination en cours contre le SRAS-CoV-2 dans de nombreuses régions du monde. Une telle approche thérapeutique basée sur le plasma consiste à utiliser des anticorps neutralisants provenant du sang de patients convalescents.

Pour répondre au besoin d'un test de neutralisation de haute qualité contre le SRAS-CoV-2, des chercheurs de l'Institut national des allergies et des maladies infectieuses (NIAID) ont modifié et optimisé un test de neutralisation par réduction de fluorescence (FRNA) précédemment établi pour permettre une évaluation qualitative d'un grand nombre de cellules infectées grâce à l'utilisation d'un système d'imagerie à haut contenu.

Dans cette étude, l’équipe a décrit un test de neutralisation hautement quantitatif à semi-haut débit pour le SRAS-CoV-2 basé sur le système d’imagerie à haut contenu Operetta. Les auteurs ont affirmé que des dispositifs similaires (qui peuvent ne pas être disponibles dans de nombreux laboratoires) pourraient être tout aussi efficaces avec une validation appropriée.

Ils ont rapporté qu’en février 2021, le FRNA du SRAS-CoV-2 avait été utilisé pour dépister plus de 5 000 échantillons, y compris des échantillons de plasma ou de sérum aigus et de convalescence et des traitements par anticorps thérapeutiques, pour les titres neutralisants du SRAS-CoV-2.

"Bien qu'il y ait toujours une variabilité dans les analyses de virus vivants en raison de la nature du système biologique, l'utilisation d'une approche statistique rigoureuse pour informer sur l'acceptabilité des données peut atténuer les effets négatifs potentiels d'une mauvaise efficacité de l'infection, d'erreurs de pipetage, d'effets de bord et de colorations incohérentes."

Le COVID-19 est une maladie hétérogène qui se manifeste souvent par des maladies respiratoires graves, des maladies cardiovasculaires et des maladies neurologiques. Au cours d'une maladie aiguë, la classe d'anticorps évolue rapidement, passant des immunoglobulines M (IgM) aux IgG et IgA. Les chercheurs notent que l’isotype de l’anticorps est tout aussi important dans le contrôle de la maladie que la protéine cible virale.

Les chercheurs ont observé que la gravité de la maladie est associée à des réponses anticorps plus robustes et plus durables contre la nucléoprotéine virale (N). Par conséquent, la présence d’anticorps anti-SARS-CoV-2 dans le sang est considérée comme une bonne mesure de l’immunité protectrice d’un candidat vaccin. Cela nécessite des méthodes rapides, fiables et sensibles pour détecter les anticorps neutralisants du SRAS-CoV-2.

Coloration par immunofluorescence des cellules infectées par le SRAS-CoV-2.A. Cellules non infectées colorées avec la coloration nucléaire Hoechst (bleu). B. Cellules infectées par le SRAS-CoV-2 et examinées avec un anticorps spécifique à la protéine N du SRAS-CoV et un anticorps secondaire Alexa594 (rouge). Les cellules ont été contre-colorées avec la coloration nucléaire Hoechst (bleu).

Cet article de presse était une revue d'un rapport scientifique préliminaire qui n'avait pas été évalué par des pairs au moment de la publication. Depuis sa publication initiale, le rapport scientifique a été évalué par des pairs et accepté pour publication dans une revue universitaire. Des liens vers les rapports préliminaires et évalués par des pairs se trouvent dans la section Sources à la fin de cet article.Afficher les sources

Le FRNA est un test hautement spécifique, quantifiable et rigoureux permettant d’évaluer les anticorps neutralisants dans un échantillon test. Le test quantifie les cellules individuelles infectées par l’ajout initial du virus et ne nécessite pas plusieurs cycles de réplication du virus.

En tant que test atypique, il ne repose pas sur la détermination subjective des effets cytopathiques cellulaires ni sur le développement de plaques multicellulaires ou de foyers immunitaires utilisant un petit nombre de particules infectieuses par puits. Les chercheurs ont examiné les observations de contrôle du virus et de contrôle cellulaire pour détecter les valeurs aberrantes et ont évalué la variabilité et la spécificité du test.

Étant donné que le test utilise des schémas de dilution en 12 étapes et une analyse logistique à quatre paramètres pour quantifier un NT50 spécifique, il permet une compréhension plus précise de la capacité de neutralisation, en particulier dans le cas d'anticorps monoclonaux ou de nanocorps.

Dans cette étude, les chercheurs ont décrit le développement d’un test de neutralisation du SRAS-CoV-2 à semi-haut débit qui exploite les capacités d’un système d’imagerie à haut contenu pour quantifier le nombre de cellules infectées dans des puits individuels. Il est important de noter que les chercheurs ont montré que le test pouvait être rapidement adapté pour être utilisé avec plusieurs variantes virales. De tels tests aident énormément et accélèrent les études précliniques sur les vaccins et les essais cliniques.

Pendant la crise du COVID-19, la Food and Drug Administration (FDA) des États-Unis a initialement approuvé un programme d'accès élargi (EAP) pour traiter les patients atteints du COVID-19 avec du plasma provenant d'individus présentant un titre de neutralisation de 1:160 ou plus. Ce programme a traité plus de 94 000 patients aux États-Unis. En août dernier, la FDA a délivré une autorisation d’utilisation d’urgence (EUA) pour permettre le traitement thérapeutique par plasma des patients atteints de COVID-19 en dehors des essais cliniques.

Les chercheurs affirment que ce test ne nécessite pas d’interprétation subjective et qu’il est donc plus précis que la plupart des autres tests permettant de neutraliser les virus de type sauvage.

"Bien qu'il y ait toujours une variabilité dans les analyses de virus vivants en raison de la nature du système biologique, l'utilisation d'une approche statistique rigoureuse pour informer l'acceptation des données peut atténuer les effets négatifs potentiels d'une mauvaise efficacité de l'infection, des erreurs de pipetage, des effets de bord et des taches d'incohérence."

Cet article de presse était une revue d'un rapport scientifique préliminaire qui n'avait pas été évalué par des pairs au moment de la publication. Depuis sa publication initiale, le rapport scientifique a été évalué par des pairs et accepté pour publication dans une revue universitaire. Des liens vers les rapports préliminaires et évalués par des pairs se trouvent dans la section Sources à la fin de cet article.Afficher les sources

Révisions d'articles

• 5. April 2023 – Die vorab gedruckte vorläufige Forschungsarbeit, auf der dieser Artikel basiert, wurde zur Veröffentlichung in einer von Experten begutachteten wissenschaftlichen Zeitschrift angenommen. Dieser Artikel wurde entsprechend bearbeitet und enthält nun einen Link zum endgültigen, von Experten begutachteten Artikel, der jetzt im Abschnitt „Quellen“ angezeigt wird.

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