Istraživači razvijaju test za kvalitativnu procjenu neutralizirajućih antitijela SARS-CoV-2

Istraživači razvijaju test za kvalitativnu procjenu neutralizirajućih antitijela SARS-CoV-2

Opsežno testiranje na infekciju teškim akutnim respiratornim sindromom koronavirusom 2 (SARS-CoV-2) bila je primarna mjera suzbijanja pandemije koja je u tijeku. Infekcija uzrokuje koronavirusnu bolest 2019 (COVID-19), koja je dosad odnijela više od 2,7 milijuna života diljem svijeta. Potreba za učinkovitim terapijskim rješenjima je velika, također s obzirom na programe cijepljenja protiv SARS-CoV-2 koji su u tijeku u mnogim dijelovima svijeta. Jedan takav terapijski pristup temeljen na plazmi je uporaba neutralizirajućih protutijela iz krvi pacijenata koji se oporavljaju.

Kako bi odgovorili na potrebu za visokokvalitetnim neutralizacijskim testom protiv SARS-CoV-2, istraživači s Nacionalnog instituta za alergije i zarazne bolesti (NIAID) modificirali su i optimizirali prethodno uspostavljeni neutralizacijski test redukcije fluorescencije (FRNA) kako bi omogućili kvalitativnu procjenu velikog broja zaraženih stanica upotrebom sustava za slikanje visokog sadržaja.

U ovoj studiji, tim je opisao polu-visoki propusni, visoko kvantitativni test neutralizacije za SARS-CoV-2 koji se temelji na Operetta sustavu slikanja visokog sadržaja. Autori su tvrdili da slični uređaji (koji možda nisu dostupni u mnogim laboratorijskim postavkama) mogu biti jednako učinkoviti uz odgovarajuću validaciju.

Izvijestili su da je od veljače 2021. SARS-CoV-2 FRNA korišten za probir više od 5000 uzoraka, uključujući akutne i rekonvalescentne uzorke plazme ili seruma i tretmane terapeutskim antitijelima, za neutralizirajuće titre SARS-CoV-2.

"Iako će uvijek postojati varijabilnost u analizama živih virusa zbog prirode biološkog sustava, upotreba rigoroznog statističkog pristupa za informiranje o prihvatljivosti podataka može ublažiti potencijalne negativne učinke slabe učinkovitosti infekcije, pogrešaka pipetiranja, rubnih učinaka i nedosljednog bojenja."

COVID-19 je heterogena bolest koja se često manifestira kao teške respiratorne bolesti, kardiovaskularne bolesti i neurološke bolesti. Tijekom akutne bolesti dolazi do brze promjene u klasi antitijela s imunoglobulina M (IgM) na IgG i IgA. Istraživači primjećuju da je izotip protutijela jednako važan u kontroli bolesti kao i ciljni protein virusa.

Istraživači su primijetili da je ozbiljnost bolesti povezana s snažnijim i dugotrajnijim odgovorima protutijela na virusni nukleoprotein (N). Stoga se vjeruje da je prisutnost anti-SARS-CoV-2 protutijela u krvi dobra mjera zaštitnog imuniteta kandidata za cjepivo. To zahtijeva brze metode koje su pouzdane i osjetljive za otkrivanje SARS-CoV-2 neutralizirajućih protutijela.

Imunofluorescentno bojenje stanica zaraženih SARS-CoV-2.A. Neinficirane stanice obojene Hoechst nuklearnom bojom (plavo). B. Stanice zaražene SARS-CoV-2 i ispitane antitijelom specifičnim za SARS-CoV N protein i sekundarnim antitijelom Alexa594 (crveno). Stanice su obojene Hoechst nuklearnom bojom (plavo).

Ovaj novinski članak bio je pregled preliminarnog znanstvenog izvješća koje nije bilo recenzirano u vrijeme objavljivanja. Od svoje prve objave, znanstveno izvješće sada je recenzirano i prihvaćeno za objavljivanje u akademskom časopisu. Veze na preliminarna i recenzirana izvješća mogu se pronaći u odjeljku Izvori na kraju ovog članka.Pogledaj izvore

FRNA je visoko specifičan, mjerljiv i rigorozan test za procjenu neutralizirajućih protutijela u testnom uzorku. Testom se kvantificiraju pojedinačne stanice zaražene početnim dodatkom virusa i ne zahtijeva više krugova replikacije virusa.

Kao atipični test, ne oslanja se na subjektivno određivanje staničnih citopatskih učinaka niti na razvoj višestaničnih plakova ili imunoloških žarišta korištenjem malog broja zaraznih čestica po jažici. Istraživači su ispitali zapažanja kontrole virusa i kontrole stanica na odstupanja i procijenili varijabilnost i specifičnost testa.

Budući da analiza koristi sheme razrjeđivanja u 12 koraka i logističku analizu s četiri parametra za kvantificiranje specifičnog NT50, omogućuje preciznije razumijevanje kapaciteta neutralizacije, posebno u slučaju monoklonskih protutijela ili nanotijela.

U ovoj su studiji istraživači opisali razvoj testa neutralizacije SARS-CoV-2 polu-visoke propusnosti koji koristi mogućnosti sustava za oslikavanje visokog sadržaja za kvantificiranje broja zaraženih stanica u pojedinačnim jažicama. Važno je da su istraživači pokazali da se test može brzo prilagoditi za korištenje s više varijanti virusa. Takvi testovi neizmjerno pomažu i ubrzavaju pretkliničke studije cjepiva i klinička ispitivanja.

Tijekom krize izazvane COVID-19, američka Uprava za hranu i lijekove (FDA) prvotno je odobrila Program proširenog pristupa (EAP) za liječenje pacijenata s COVID-19 plazmom pojedinaca s titrom neutralizacije 1:160 ili višim. Ovaj je program liječio preko 94 000 pacijenata diljem Sjedinjenih Država. U kolovozu prošle godine FDA je izdala odobrenje za hitnu upotrebu (EUA) kako bi se omogućilo terapijsko liječenje plazmom pacijenata s COVID-19 izvan kliničkih ispitivanja.

Istraživači tvrde da ovaj test ne zahtijeva subjektivno tumačenje i stoga je precizniji od većine drugih testova za neutralizaciju virusa divljeg tipa.

"Iako će uvijek postojati varijabilnost u analizama živih virusa zbog prirode biološkog sustava, korištenje rigoroznog statističkog pristupa za informiranje o prihvaćanju podataka može ublažiti potencijalne negativne učinke slabe učinkovitosti infekcije, pogrešaka pipetiranja, rubnih učinaka i nedosljednih mrlja."

Ovaj novinski članak bio je pregled preliminarnog znanstvenog izvješća koje nije bilo recenzirano u vrijeme objavljivanja. Od svoje prve objave, znanstveno izvješće sada je recenzirano i prihvaćeno za objavljivanje u akademskom časopisu. Veze na preliminarna i recenzirana izvješća mogu se pronaći u odjeljku Izvori na kraju ovog članka.Pogledaj izvore

Revizije članaka

• 5. April 2023 – Die vorab gedruckte vorläufige Forschungsarbeit, auf der dieser Artikel basiert, wurde zur Veröffentlichung in einer von Experten begutachteten wissenschaftlichen Zeitschrift angenommen. Dieser Artikel wurde entsprechend bearbeitet und enthält nun einen Link zum endgültigen, von Experten begutachteten Artikel, der jetzt im Abschnitt „Quellen“ angezeigt wird.

Izvori: