A kutatók tesztet dolgoznak ki a semlegesítő SARS-CoV-2 antitestek kvalitatív értékelésére

A kutatók tesztet dolgoznak ki a semlegesítő SARS-CoV-2 antitestek kvalitatív értékelésére

A súlyos akut légúti szindróma koronavírus 2 (SARS-CoV-2) fertőzésének kiterjedt tesztelése volt az elsődleges védekezési intézkedés a folyamatban lévő világjárvány megfékezésére. A fertőzés a 2019-es koronavírus-betegséget (COVID-19) okozza, amely eddig több mint 2,7 millió emberéletet követelt világszerte. A hatékony terápiás megoldások iránti igény nagy, tekintettel a világ számos részén folyamatban lévő SARS-CoV-2 elleni oltási programokra is. Az egyik ilyen plazmaalapú terápiás megközelítés a lábadozó betegek véréből származó neutralizáló antitestek alkalmazása.

A SARS-CoV-2 elleni jó minőségű neutralizációs teszt szükségességének kielégítése érdekében az Országos Allergia és Fertőző Betegségek Intézetének (NIAID) kutatói módosították és optimalizálták a korábban bevezetett fluoreszcencia-csökkentési neutralizációs (FRNA) tesztet, hogy lehetővé tegyék nagyszámú fertőzött sejt kvalitatív értékelését egy nagy tartalmú képalkotó rendszer segítségével.

Ebben a tanulmányban a csapat egy félig nagy áteresztőképességű, nagyon kvantitatív semlegesítési tesztet írt le a SARS-CoV-2 kimutatására, amely az Operetta nagy tartalmú képalkotó rendszeren alapul. A szerzők azt állították, hogy a hasonló eszközök (amelyek sok laboratóriumi beállításban nem állnak rendelkezésre) ugyanolyan hatékonyak lehetnek megfelelő validációval.

Beszámoltak arról, hogy 2021 februárja óta a SARS-CoV-2 FRNS-t több mint 5000 minta, köztük akut és lábadozó plazma- vagy szérumminták, valamint terápiás antitestkezelések szűrésére használták a SARS-CoV-2 semlegesítő titerek kimutatására.

"Bár a biológiai rendszer természetéből adódóan az élő vírusvizsgálatok mindig változnak, az adatok elfogadhatóságáról szóló szigorú statisztikai megközelítés csökkentheti a rossz fertőzési hatékonyság, a pipettázási hibák, az élhatások és az inkonzisztens festés lehetséges negatív hatásait."

A COVID-19 egy heterogén betegség, amely gyakran súlyos légúti betegségekben, szív- és érrendszeri betegségekben és neurológiai betegségekben nyilvánul meg. Egy akut betegség során az antitestek osztálya gyorsan változik az immunglobulin M-ről (IgM) IgG-re és IgA-ra. A kutatók megjegyzik, hogy az antitest izotípusa ugyanolyan fontos a betegség leküzdésében, mint a vírus célfehérje.

A kutatók megfigyelték, hogy a betegség súlyossága a vírus nukleoproteinjére (N) szembeni erősebb és hosszabb ideig tartó antitestválaszokkal jár. Ezért úgy vélik, hogy a SARS-CoV-2 elleni antitestek vérben való jelenléte jó mérőszáma a vakcinajelölt védő immunitásának. Ehhez gyors módszerekre van szükség, amelyek megbízhatóak és érzékenyek a SARS-CoV-2 semlegesítő antitestek kimutatására.

SARS-CoV-2-vel fertőzött sejtek immunfluoreszcens festése.A. Hoechst nukleáris festéssel (kék) megfestett nem fertőzött sejtek. B. SARS-CoV-2-vel fertőzött és SARS-CoV N fehérje-specifikus antitesttel és Alexa594 másodlagos antitesttel (piros) vizsgált sejtek. A sejteket Hoechst nukleáris festékkel (kék) ellenfestettük.

Ez a hírcikk egy előzetes tudományos jelentés áttekintése volt, amelyet a közzététel időpontjában még nem értékeltek szakértők. Az első megjelenés óta a tudományos jelentést szakértői lektoráltak, és elfogadták egy tudományos folyóiratban való közzétételre. Az előzetes és a lektorált jelentésekre mutató hivatkozások a cikk végén található Források részben találhatók.Források megtekintése

Az FRNS egy nagyon specifikus, számszerűsíthető és szigorú teszt a vizsgált mintában lévő neutralizáló antitestek értékelésére. A vizsgálat a vírus kezdeti hozzáadásával fertőzött egyes sejteket mennyiségileg meghatározza, és nem igényel több vírusreplikációt.

Atipikus tesztként nem támaszkodik a sejt citopátiás hatásainak szubjektív meghatározására, sem többsejtű plakkok vagy immungócok kialakulására, üregenkénti kis számú fertőző részecskével. A kutatók megvizsgálták a víruskontroll és a sejtkontroll megfigyeléseket a kiugró értékekre vonatkozóan, és értékelték a vizsgálat variabilitását és specificitását.

Mivel a vizsgálat 12 lépéses hígítási sémákat és négyparaméteres logisztikus elemzést használ egy specifikus NT50 mennyiségi meghatározására, lehetővé teszi a semlegesítési kapacitás pontosabb megértését, különösen a monoklonális antitestek vagy nanotestek esetében.

Ebben a tanulmányban a kutatók egy félig nagy áteresztőképességű SARS-CoV-2 semlegesítési vizsgálat kifejlesztését írták le, amely egy nagy tartalmú képalkotó rendszer képességeit használja fel az egyes lyukakban lévő fertőzött sejtek számának meghatározására. Fontos, hogy a kutatók kimutatták, hogy a teszt gyorsan adaptálható több vírusváltozattal való használatra. Az ilyen tesztek rendkívül sokat segítenek és felgyorsítják a preklinikai vakcina- és klinikai vizsgálatokat.

A COVID-19-válság idején az Egyesült Államok Élelmiszer- és Gyógyszerügyi Hatósága (FDA) kezdetben egy kiterjesztett hozzáférési programot (EAP) hagyott jóvá a COVID-19-betegek plazmájának kezelésére olyan személyektől, akiknek neutralizációs titere 1:160 vagy magasabb. Ez a program több mint 94 000 beteget kezelt szerte az Egyesült Államokban. Tavaly augusztusban az FDA sürgősségi felhasználási engedélyt (EUA) adott ki, amely lehetővé teszi a COVID-19-betegek terápiás plazmakezelését a klinikai vizsgálatokon kívül.

A kutatók azt állítják, hogy ez a teszt nem igényel szubjektív értelmezést, ezért pontosabb, mint a legtöbb más vad típusú vírusok semlegesítésére szolgáló teszt.

„Bár a biológiai rendszer természetéből adódóan az élő vírustesztek mindig változnak, az adatok elfogadásáról szóló szigorú statisztikai megközelítés mérsékelheti a rossz fertőzési hatékonyság, a pipettázási hibák, az élhatások és az inkonzisztencia foltok lehetséges negatív hatásait.”

Ez a hírcikk egy előzetes tudományos jelentés áttekintése volt, amelyet a közzététel időpontjában még nem értékeltek szakértők. Az első megjelenés óta a tudományos jelentést szakértői lektoráltak, és elfogadták egy tudományos folyóiratban való közzétételre. Az előzetes és a lektorált jelentésekre mutató hivatkozások a cikk végén található Források részben találhatók.Források megtekintése

Cikk revíziók

• 5. April 2023 – Die vorab gedruckte vorläufige Forschungsarbeit, auf der dieser Artikel basiert, wurde zur Veröffentlichung in einer von Experten begutachteten wissenschaftlichen Zeitschrift angenommen. Dieser Artikel wurde entsprechend bearbeitet und enthält nun einen Link zum endgültigen, von Experten begutachteten Artikel, der jetzt im Abschnitt „Quellen“ angezeigt wird.

Források: