I ricercatori sviluppano un test per la valutazione qualitativa degli anticorpi neutralizzanti la SARS-CoV-2

I ricercatori sviluppano un test per la valutazione qualitativa degli anticorpi neutralizzanti la SARS-CoV-2

I test approfonditi per l’infezione da sindrome respiratoria acuta grave da coronavirus 2 (SARS-CoV-2) sono stati una misura di contenimento primaria per contenere la pandemia in corso. L’infezione causa la malattia da coronavirus 2019 (COVID-19), che finora ha causato oltre 2,7 milioni di vittime in tutto il mondo. La necessità di soluzioni terapeutiche efficaci è grande, anche visti i programmi di vaccinazione contro la SARS-CoV-2 in corso in molte parti del mondo. Uno di questi approcci terapeutici basati sul plasma è l’uso di anticorpi neutralizzanti provenienti dal sangue di pazienti convalescenti.

Per rispondere alla necessità di un test di neutralizzazione di alta qualità contro SARS-CoV-2, i ricercatori dell’Istituto nazionale di allergie e malattie infettive (NIAID) hanno modificato e ottimizzato un test di neutralizzazione con riduzione della fluorescenza (FRNA) precedentemente stabilito per consentire la valutazione qualitativa di un gran numero di cellule infette attraverso l’uso di un sistema di imaging ad alto contenuto.

In questo studio, il gruppo ha descritto un'analisi di neutralizzazione semi-high-throughput e altamente quantitativa per SARS-CoV-2 basata sul sistema di formazione immagine ad alto contenuto di Operetta. Gli autori hanno affermato che dispositivi simili (che potrebbero non essere disponibili in molti laboratori) potrebbero essere ugualmente efficaci con un'adeguata validazione.

Hanno riferito che a partire da febbraio 2021, l’FRNA di SARS-CoV-2 era stato utilizzato per esaminare oltre 5.000 campioni, inclusi campioni di plasma o siero acuti e convalescenti e trattamenti anticorpali terapeutici, per i titoli neutralizzanti la SARS-CoV-2.

"Sebbene ci sia sempre variabilità nei test sui virus vivi a causa della natura del sistema biologico, l'utilizzo di un approccio statistico rigoroso per informare l'accettabilità dei dati può mitigare i potenziali effetti negativi di scarsa efficienza dell'infezione, errori di pipettaggio, effetti marginali e colorazione incoerente."

Il COVID-19 è una malattia eterogenea che spesso si manifesta come gravi malattie respiratorie, malattie cardiovascolari e malattie neurologiche. Durante una malattia acuta si verifica un rapido cambiamento nella classe degli anticorpi da immunoglobuline M (IgM) a IgG e IgA. I ricercatori notano che l’isotipo dell’anticorpo è altrettanto importante nel controllo della malattia quanto la proteina bersaglio virale.

I ricercatori hanno osservato che la gravità della malattia è associata a risposte anticorpali più robuste e più durature alla nucleoproteina virale (N). Pertanto, si ritiene che la presenza di anticorpi anti-SARS-CoV-2 nel sangue sia una buona misura dell’immunità protettiva di un candidato al vaccino. Ciò richiede metodi rapidi, affidabili e sensibili per rilevare gli anticorpi neutralizzanti la SARS-CoV-2.

Colorazione con immunofluorescenza delle cellule infette da SARS-CoV-2.A. Cellule non infette colorate con la colorazione nucleare di Hoechst (blu). B. Cellule infettate con SARS-CoV-2 ed esaminate con un anticorpo specifico per la proteina SARS-CoV N e un anticorpo secondario Alexa594 (rosso). Le cellule sono state controcolorate con la colorazione nucleare di Hoechst (blu).

Questo articolo di notizie era una revisione di un rapporto scientifico preliminare che non era stato sottoposto a revisione paritaria al momento della pubblicazione. Dalla sua pubblicazione iniziale, il rapporto scientifico è stato ora sottoposto a revisione paritaria e accettato per la pubblicazione in una rivista accademica. I collegamenti ai rapporti preliminari e sottoposti a revisione paritaria possono essere trovati nella sezione Fonti alla fine di questo articolo.Visualizza fonti

L'FRNA è un test altamente specifico, quantificabile e rigoroso per valutare gli anticorpi neutralizzanti in un campione di analisi. Il test quantifica le singole cellule infettate con l'aggiunta iniziale del virus e non richiede più cicli di replicazione del virus.

Essendo un test atipico, non si basa sulla determinazione soggettiva degli effetti citopatici cellulari né sullo sviluppo di placche multicellulari o foci immunitari utilizzando un piccolo numero di particelle infettive per pozzetto. I ricercatori hanno esaminato le osservazioni sul controllo del virus e sul controllo cellulare per individuare eventuali valori anomali e hanno valutato la variabilità e la specificità del test.

Poiché il test utilizza schemi di diluizione in 12 fasi e un'analisi logistica a quattro parametri per quantificare un NT50 specifico, consente una comprensione più precisa della capacità di neutralizzazione, in particolare nel caso di anticorpi monoclonali o nanocorpi.

In questo studio, i ricercatori hanno descritto lo sviluppo di un’analisi di neutralizzazione della SARS-CoV-2 a resa semi-alta che sfrutta le capacità di un sistema di imaging ad alto contenuto per quantificare il numero di cellule infette nei singoli pozzetti. È importante sottolineare che i ricercatori hanno dimostrato che il test potrebbe essere rapidamente adattato per l’uso con più varianti di virus. Tali test aiutano immensamente e accelerano gli studi preclinici sui vaccini e le sperimentazioni cliniche.

Durante la crisi del COVID-19, la Food and Drug Administration (FDA) statunitense ha inizialmente approvato un programma di accesso espanso (EAP) per trattare i pazienti affetti da COVID-19 con plasma proveniente da individui con un titolo di neutralizzazione pari o superiore a 1:160. Questo programma ha trattato oltre 94.000 pazienti negli Stati Uniti. Lo scorso agosto, la FDA ha rilasciato un’autorizzazione all’uso di emergenza (EUA) per consentire il trattamento terapeutico con plasma dei pazienti affetti da COVID-19 al di fuori degli studi clinici.

I ricercatori sostengono che questo test non richiede un'interpretazione soggettiva ed è quindi più preciso della maggior parte degli altri test per neutralizzare i virus di tipo selvaggio.

“Sebbene ci sarà sempre variabilità nei test sui virus vivi a causa della natura del sistema biologico, l’utilizzo di un approccio statistico rigoroso per informare l’accettazione dei dati può mitigare i potenziali effetti negativi della scarsa efficienza dell’infezione, degli errori di pipettaggio, degli effetti marginali e delle macchie di incoerenza”.

Questo articolo di notizie era una revisione di un rapporto scientifico preliminare che non era stato sottoposto a revisione paritaria al momento della pubblicazione. Dalla sua pubblicazione iniziale, il rapporto scientifico è stato ora sottoposto a revisione paritaria e accettato per la pubblicazione in una rivista accademica. I collegamenti ai rapporti preliminari e sottoposti a revisione paritaria possono essere trovati nella sezione Fonti alla fine di questo articolo.Visualizza fonti

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• 5. April 2023 – Die vorab gedruckte vorläufige Forschungsarbeit, auf der dieser Artikel basiert, wurde zur Veröffentlichung in einer von Experten begutachteten wissenschaftlichen Zeitschrift angenommen. Dieser Artikel wurde entsprechend bearbeitet und enthält nun einen Link zum endgültigen, von Experten begutachteten Artikel, der jetzt im Abschnitt „Quellen“ angezeigt wird.

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