Tyrėjai kuria kokybinio neutralizuojančių SARS-CoV-2 antikūnų įvertinimo testą

Tyrėjai kuria kokybinio neutralizuojančių SARS-CoV-2 antikūnų įvertinimo testą

Išsamūs tyrimai dėl sunkaus ūminio kvėpavimo sindromo koronaviruso 2 (SARS-CoV-2) infekcijos buvo pagrindinė kovos su šiuo pandemija priemonė. Infekcija sukelia koronavirusinę ligą 2019 (COVID-19), kuri iki šiol visame pasaulyje nusinešė daugiau nei 2,7 mln. Veiksmingų terapinių sprendimų poreikis yra didelis, taip pat atsižvelgiant į daugelyje pasaulio šalių vykdomas vakcinacijos nuo SARS-CoV-2 programas. Vienas iš tokių plazmos terapijos metodų yra neutralizuojančių antikūnų iš sveikstančių pacientų kraujo naudojimas.

Siekdami išspręsti aukštos kokybės SARS-CoV-2 neutralizacijos testo poreikį, Nacionalinio alergijos ir infekcinių ligų instituto (NIAID) mokslininkai modifikavo ir optimizavo anksčiau nustatytą fluorescencijos mažinimo neutralizavimo (FRNR) testą, kad būtų galima kokybiškai įvertinti daugybę užkrėstų ląstelių naudojant didelio turinio vaizdo gavimo sistemą.

Šiame tyrime komanda aprašė pusiau didelio našumo, labai kiekybinį SARS-CoV-2 neutralizacijos tyrimą, pagrįstą didelio turinio vaizdo gavimo sistema Operetta. Autoriai teigė, kad panašūs prietaisai (kurių gali nebūti daugelyje laboratorinių nustatymų) gali būti vienodai veiksmingi su tinkamu patvirtinimu.

Jie pranešė, kad 2021 m. vasario mėn. SARS-CoV-2 FRNR buvo naudojama daugiau nei 5 000 mėginių, įskaitant ūminius ir sveikstančius plazmos ar serumo mėginius bei terapinį antikūnų gydymą, tikrinti, ar nėra SARS-CoV-2 neutralizuojančių titrų.

„Nors gyvų virusų tyrimai visada skirsis dėl biologinės sistemos pobūdžio, naudojant griežtą statistinį metodą, skirtą informuoti apie duomenų priimtinumą, galima sušvelninti galimą neigiamą prasto infekcijos efektyvumo, pipetavimo klaidų, kraštų poveikio ir nenuoseklaus dažymo poveikį.

COVID-19 yra nevienalytė liga, kuri dažnai pasireiškia sunkiomis kvėpavimo takų, širdies ir kraujagyslių bei neurologinėmis ligomis. Ūmios ligos metu greitai keičiasi antikūnų klasė iš imunoglobulino M (IgM) į IgG ir IgA. Tyrėjai pažymi, kad antikūnų izotipas yra toks pat svarbus kontroliuojant ligą, kaip ir viruso tikslinis baltymas.

Tyrėjai pastebėjo, kad ligos sunkumas yra susijęs su tvirtesniu ir ilgesniu antikūnų atsaku į viruso nukleoproteiną (N). Todėl manoma, kad antikūnų prieš SARS-CoV-2 buvimas kraujyje yra geras kandidato į vakciną apsauginio imuniteto matas. Tam reikalingi greiti metodai, kurie būtų patikimi ir jautrūs SARS-CoV-2 neutralizuojantiems antikūnams aptikti.

SARS-CoV-2 užkrėstų ląstelių dažymas imunofluorescenciniu būdu.A. Neinfekuotos ląstelės, nudažytos Hoechst branduoliniu dėme (mėlyna). B. Ląstelės, užkrėstos SARS-CoV-2 ir ištirtos SARS-CoV N baltymui specifiniu antikūnu ir Alexa594 antriniu antikūnu (raudonas). Ląstelės buvo nudažytos Hoechst branduoliniu dėme (mėlyna).

Šis naujienų straipsnis buvo išankstinės mokslinės ataskaitos, kuri publikavimo metu nebuvo recenzuota, apžvalga. Nuo pat pirminio paskelbimo mokslinė ataskaita buvo recenzuojama ir priimta publikuoti akademiniame žurnale. Nuorodos į preliminarias ir recenzuotas ataskaitas rasite skiltyje Šaltiniai šio straipsnio pabaigoje.Žiūrėti šaltinius

FRNR yra labai specifinis, kiekybiškai įvertinamas ir griežtas testas, skirtas neutralizuojantiems antikūnams tiriamajame mėginyje įvertinti. Tyrimas kiekybiškai įvertina atskiras ląsteles, užkrėstas pradiniu viruso pridėjimu, ir nereikalauja kelių viruso replikacijos raundų.

Kaip netipinis tyrimas, jis nesiremia nei subjektyviu ląstelių citopatinio poveikio nustatymu, nei daugialąsčių apnašų ar imuninių židinių atsiradimu, naudojant nedidelį infekcinių dalelių skaičių viename šulinyje. Tyrėjai ištyrė viruso kontrolės ir ląstelių kontrolės stebėjimus dėl pašalinių rodiklių ir įvertino tyrimo kintamumą bei specifiškumą.

Kadangi tyrime naudojamos 12 pakopų skiedimo schemos ir keturių parametrų logistinė analizė, siekiant kiekybiškai įvertinti konkretų NT50, tai leidžia tiksliau suprasti neutralizavimo pajėgumą, ypač monokloninių antikūnų ar nanokūnų atveju.

Šiame tyrime mokslininkai aprašė pusiau didelio našumo SARS-CoV-2 neutralizavimo tyrimo, kuris panaudoja didelio turinio vaizdo gavimo sistemos galimybes kiekybiškai įvertinti užkrėstų ląstelių skaičių atskiruose šuliniuose, sukūrimą. Svarbu tai, kad mokslininkai parodė, kad testą galima greitai pritaikyti naudoti su keliais viruso variantais. Tokie testai labai padeda ir paspartina ikiklinikinius vakcinų tyrimus ir klinikinius tyrimus.

COVID-19 krizės metu JAV Maisto ir vaistų administracija (FDA) iš pradžių patvirtino Išplėstinės prieigos programą (EAP), skirtą COVID-19 pacientams gydyti plazma iš asmenų, kurių neutralizacijos titras yra 1:160 ar didesnis. Ši programa gydė daugiau nei 94 000 pacientų Jungtinėse Valstijose. Praėjusį rugpjūtį FDA išdavė skubaus naudojimo leidimą (EUA), leidžiantį COVID-19 pacientų terapinį gydymą plazma ne klinikinių tyrimų metu.

Tyrėjai tvirtina, kad šis testas nereikalauja subjektyvios interpretacijos, todėl yra tikslesnis nei dauguma kitų laukinio tipo virusų neutralizavimo testų.

„Nors gyvų virusų tyrimai visada skirsis dėl biologinės sistemos pobūdžio, naudojant griežtą statistinį metodą, skirtą informuoti apie duomenų priėmimą, galima sušvelninti galimą neigiamą prasto infekcijos efektyvumo, pipetavimo klaidų, krašto efektų ir nenuoseklumo dėmių poveikį.

Šis naujienų straipsnis buvo išankstinės mokslinės ataskaitos, kuri publikavimo metu nebuvo recenzuota, apžvalga. Nuo pat pirminio paskelbimo mokslinė ataskaita buvo recenzuojama ir priimta publikuoti akademiniame žurnale. Nuorodos į preliminarias ir recenzuotas ataskaitas rasite skiltyje Šaltiniai šio straipsnio pabaigoje.Žiūrėti šaltinius

Straipsnių pataisymai

• 5. April 2023 – Die vorab gedruckte vorläufige Forschungsarbeit, auf der dieser Artikel basiert, wurde zur Veröffentlichung in einer von Experten begutachteten wissenschaftlichen Zeitschrift angenommen. Dieser Artikel wurde entsprechend bearbeitet und enthält nun einen Link zum endgültigen, von Experten begutachteten Artikel, der jetzt im Abschnitt „Quellen“ angezeigt wird.

Šaltiniai: