Pētnieki izstrādā testu neitralizējošu SARS-CoV-2 antivielu kvalitatīvai novērtēšanai

Pētnieki izstrādā testu neitralizējošu SARS-CoV-2 antivielu kvalitatīvai novērtēšanai

Plaša smaga akūta respiratorā sindroma koronavīrusa 2 (SARS-CoV-2) infekcijas pārbaude ir bijusi primārais ierobežošanas pasākums notiekošās pandēmijas ierobežošanai. Infekcija izraisa koronavīrusa slimību 2019 (COVID-19), kas līdz šim ir prasījusi vairāk nekā 2,7 miljonus dzīvību visā pasaulē. Nepieciešamība pēc efektīviem terapeitiskiem risinājumiem ir liela, ņemot vērā arī pašlaik notiekošās vakcinācijas programmas pret SARS-CoV-2 daudzās pasaules daļās. Viena no šādām uz plazmu balstītām terapeitiskām pieejām ir neitralizējošu antivielu izmantošana no atveseļojošu pacientu asinīm.

Lai risinātu vajadzību pēc augstas kvalitātes neitralizācijas testa pret SARS-CoV-2, Nacionālā alerģijas un infekcijas slimību institūta (NIAID) pētnieki modificēja un optimizēja iepriekš izveidoto fluorescences samazināšanas neitralizācijas (FRNA) testu, lai ļautu kvalitatīvi novērtēt lielu skaitu inficētu šūnu, izmantojot augsta satura attēlveidošanas sistēmu.

Šajā pētījumā komanda aprakstīja daļēji augstas caurlaidspējas, ļoti kvantitatīvu SARS-CoV-2 neitralizācijas testu, kura pamatā ir Operetta augsta satura attēlveidošanas sistēma. Autori apgalvoja, ka līdzīgas ierīces (kas var nebūt pieejamas daudzos laboratorijas iestatījumos) varētu būt vienlīdz efektīvas ar atbilstošu validāciju.

Viņi ziņoja, ka līdz 2021. gada februārim SARS-CoV-2 FRNS tika izmantota, lai pārbaudītu vairāk nekā 5000 paraugu, tostarp akūtus un atveseļojošus plazmas vai seruma paraugus un terapeitisko antivielu ārstēšanu, lai noteiktu SARS-CoV-2 neitralizējošus titru.

"Lai gan dzīvu vīrusu testos vienmēr būs mainīgums bioloģiskās sistēmas rakstura dēļ, stingras statistikas pieeja, lai informētu par datu pieņemamību, var mazināt iespējamās negatīvās sekas, ko rada slikta infekcijas efektivitāte, pipetes kļūdas, malu efekti un nekonsekventa krāsošana."

COVID-19 ir neviendabīga slimība, kas bieži izpaužas kā smagas elpceļu slimības, sirds un asinsvadu slimības un neiroloģiskas slimības. Akūtas slimības laikā notiek strauja antivielu klases maiņa no imūnglobulīna M (IgM) uz IgG un IgA. Pētnieki atzīmē, ka antivielu izotips ir tikpat svarīgs slimības kontrolē kā vīrusa mērķa proteīns.

Pētnieki novēroja, ka slimības smagums ir saistīts ar spēcīgāku un ilgstošāku antivielu reakciju uz vīrusa nukleoproteīnu (N). Tāpēc tiek uzskatīts, ka anti-SARS-CoV-2 antivielu klātbūtne asinīs ir labs vakcīnas kandidāta aizsargājošās imunitātes rādītājs. Tam nepieciešamas ātras metodes, kas ir uzticamas un jutīgas, lai noteiktu SARS-CoV-2 neitralizējošās antivielas.

Ar SARS-CoV-2 inficētu šūnu imunofluorescences krāsošana.A. Neinficētas šūnas, kas iekrāsotas ar Hoechst kodolkrāsojumu (zils). B. Šūnas, kas inficētas ar SARS-CoV-2 un pārbaudītas ar SARS-CoV N proteīnam specifisku antivielu un Alexa594 sekundāro antivielu (sarkanā krāsā). Šūnas tika iekrāsotas ar Hoechst kodolkrāsojumu (zilu).

Šis ziņu raksts bija pārskats par sākotnējo zinātnisko ziņojumu, kas publicēšanas laikā nebija recenzēts. Kopš sākotnējās publicēšanas zinātniskais ziņojums tagad ir recenzēts un pieņemts publicēšanai akadēmiskajā žurnālā. Saites uz provizoriskajiem un salīdzinošajiem pārskatiem ir atrodamas sadaļā Avoti šī raksta beigās.Skatīt avotus

FRNS ir ļoti specifisks, kvantitatīvi nosakāms un stingrs tests, lai novērtētu neitralizējošās antivielas testa paraugā. Pārbaudē kvantitatīvi nosaka atsevišķas šūnas, kas inficētas ar sākotnējo vīrusa pievienošanu, un nav nepieciešamas vairākas vīrusa replikācijas kārtas.

Kā netipisks tests, tas nav balstīts uz subjektīvu šūnu citopātiskās iedarbības noteikšanu vai uz daudzšūnu plāksnīšu vai imūno perēkļu veidošanos, izmantojot nelielu skaitu infekciozo daļiņu katrā iedobē. Pētnieki pārbaudīja vīrusu kontroles un šūnu kontroles novērojumus attiecībā uz novirzēm un novērtēja testa mainīgumu un specifiku.

Tā kā testā tiek izmantotas 12 pakāpju atšķaidīšanas shēmas un četru parametru loģistikas analīze, lai noteiktu konkrētu NT50, tas ļauj precīzāk izprast neitralizācijas spēju, jo īpaši monoklonālo antivielu vai nanoķermeņu gadījumā.

Šajā pētījumā pētnieki aprakstīja daļēji augstas caurlaidības SARS-CoV-2 neitralizācijas testa izstrādi, kas izmanto liela satura attēlveidošanas sistēmas iespējas, lai noteiktu inficēto šūnu skaitu atsevišķās iedobēs. Svarīgi, ka pētnieki parādīja, ka testu var ātri pielāgot lietošanai ar vairākiem vīrusu variantiem. Šādi testi ļoti palīdz un paātrina preklīniskos vakcīnu pētījumus un klīniskos izmēģinājumus.

COVID-19 krīzes laikā ASV Pārtikas un zāļu pārvalde (FDA) sākotnēji apstiprināja paplašinātās piekļuves programmu (EAP), lai ārstētu COVID-19 pacientus ar plazmu no personām, kuru neitralizācijas titrs ir 1:160 vai augstāks. Šī programma ir ārstējusi vairāk nekā 94 000 pacientu visā ASV. Pagājušā gada augustā FDA izdeva ārkārtas lietošanas atļauju (EUA), lai atļautu Covid-19 pacientu terapeitisko plazmas ārstēšanu ārpus klīniskajiem pētījumiem.

Pētnieki apgalvo, ka šim testam nav nepieciešama subjektīva interpretācija un tāpēc tas ir precīzāks nekā vairums citu testu savvaļas tipa vīrusu neitralizēšanai.

"Lai gan bioloģiskās sistēmas rakstura dēļ dzīvu vīrusu pārbaudēs vienmēr būs atšķirības, stingras statistikas pieeja, lai informētu par datu pieņemšanu, var mazināt iespējamās negatīvās sekas, ko rada slikta infekcijas efektivitāte, pipetēšanas kļūdas, malu efekti un nekonsekvences traipi."

Šis ziņu raksts bija pārskats par sākotnējo zinātnisko ziņojumu, kas publicēšanas laikā nebija recenzēts. Kopš sākotnējās publicēšanas zinātniskais ziņojums tagad ir recenzēts un pieņemts publicēšanai akadēmiskajā žurnālā. Saites uz provizoriskajiem un salīdzinošajiem pārskatiem ir atrodamas sadaļā Avoti šī raksta beigās.Skatīt avotus

Rakstu labojumi

• 5. April 2023 – Die vorab gedruckte vorläufige Forschungsarbeit, auf der dieser Artikel basiert, wurde zur Veröffentlichung in einer von Experten begutachteten wissenschaftlichen Zeitschrift angenommen. Dieser Artikel wurde entsprechend bearbeitet und enthält nun einen Link zum endgültigen, von Experten begutachteten Artikel, der jetzt im Abschnitt „Quellen“ angezeigt wird.

Avoti: