Os pesquisadores desenvolvem o ensaio para a avaliação qualitativa de neutralizar anticorpos SARS-CoV-2

Os pesquisadores desenvolvem o ensaio para a avaliação qualitativa de neutralizar anticorpos SARS-CoV-2

Testes extensivos para infecção por coronavírus 2 da síndrome respiratória aguda grave (SARS-CoV-2) têm sido uma medida de contenção primária para conter a pandemia em curso. A infecção causa a doença coronavírus 2019 (COVID-19), que até agora ceifou mais de 2,7 milhões de vidas em todo o mundo. A necessidade de soluções terapêuticas eficazes é grande, também tendo em conta os programas de vacinação em curso contra o SARS-CoV-2 em muitas partes do mundo. Uma dessas abordagens terapêuticas baseadas no plasma é a utilização de anticorpos neutralizantes do sangue de pacientes convalescentes.

Para atender à necessidade de um teste de neutralização de alta qualidade contra SARS-CoV-2, pesquisadores do Instituto Nacional de Alergia e Doenças Infecciosas (NIAID) modificaram e otimizaram um teste de neutralização por redução de fluorescência (FRNA) previamente estabelecido para permitir a avaliação qualitativa de um grande número de células infectadas através do uso de um sistema de imagem de alto conteúdo.

Neste estudo, a equipe descreveu um ensaio de neutralização altamente quantitativo e de semi-alto rendimento para SARS-CoV-2 baseado no sistema de imagem de alto conteúdo Operetta. Os autores alegaram que dispositivos semelhantes (que podem não estar disponíveis em muitos ambientes laboratoriais) poderiam ser igualmente eficazes com validação apropriada.

Eles relataram que, em fevereiro de 2021, o SARS-CoV-2 FRNA foi usado para rastrear mais de 5.000 amostras, incluindo amostras de plasma ou soro agudo e convalescente e tratamentos terapêuticos com anticorpos, para títulos neutralizantes de SARS-CoV-2.

"Embora sempre haja variabilidade nos ensaios de vírus vivos devido à natureza do sistema biológico, o uso de uma abordagem estatística rigorosa para informar a aceitabilidade dos dados pode mitigar os potenciais efeitos negativos da baixa eficiência da infecção, erros de pipetagem, efeitos de borda e coloração inconsistente."

A COVID-19 é uma doença heterogênea que frequentemente se manifesta como doenças respiratórias graves, doenças cardiovasculares e doenças neurológicas. Durante uma doença aguda, ocorre uma rápida mudança na classe de anticorpos da imunoglobulina M (IgM) para IgG e IgA. Os investigadores observam que o isotipo do anticorpo é tão importante no controlo da doença como a proteína alvo viral.

Os investigadores observaram que a gravidade da doença está associada a respostas de anticorpos mais robustas e duradouras à nucleoproteína viral (N). Portanto, acredita-se que a presença de anticorpos anti-SARS-CoV-2 no sangue seja uma boa medida da imunidade protetora de uma vacina candidata. Isto requer métodos rápidos, confiáveis ​​e sensíveis para detectar anticorpos neutralizantes do SARS-CoV-2.

Coloração por imunofluorescência de células infectadas por SARS-CoV-2.A. Células não infectadas coradas com coloração nuclear Hoechst (azul). B. Células infectadas com SARS-CoV-2 e examinadas com um anticorpo específico para a proteína SARS-CoV N e um anticorpo secundário Alexa594 (vermelho). As células foram contrastadas com coloração nuclear Hoechst (azul).

Esta notícia foi uma revisão de um relatório científico preliminar que não havia sido revisado por pares no momento da publicação. Desde a sua publicação inicial, o relatório científico foi agora revisto por pares e aceite para publicação numa revista académica. Links para os relatórios preliminares e revisados ​​por pares podem ser encontrados na seção Fontes no final deste artigo.Ver fontes

O FRNA é um teste altamente específico, quantificável e rigoroso para avaliar anticorpos neutralizantes em uma amostra de teste. O ensaio quantifica células individuais infectadas com a adição inicial de vírus e não requer múltiplos ciclos de replicação do vírus.

Sendo um teste atípico, não se baseia na determinação subjetiva dos efeitos citopáticos celulares nem no desenvolvimento de placas multicelulares ou focos imunológicos utilizando um pequeno número de partículas infecciosas por poço. Os pesquisadores examinaram as observações do controle do vírus e do controle celular em busca de valores discrepantes e avaliaram a variabilidade e especificidade do ensaio.

Como o ensaio utiliza esquemas de diluição em 12 etapas e análise logística de quatro parâmetros para quantificar um NT50 específico, permite uma compreensão mais precisa da capacidade de neutralização, particularmente no caso de anticorpos monoclonais ou nanocorpos.

Neste estudo, os pesquisadores descreveram o desenvolvimento de um ensaio de neutralização de SARS-CoV-2 de rendimento semi-alto que aproveita as capacidades de um sistema de imagem de alto conteúdo para quantificar o número de células infectadas em poços individuais. É importante ressaltar que os pesquisadores mostraram que o teste poderia ser rapidamente adaptado para uso com múltiplas variantes do vírus. Esses testes ajudam imensamente e aceleram os estudos pré-clínicos de vacinas e os ensaios clínicos.

Durante a crise da COVID-19, a Food and Drug Administration (FDA) dos EUA aprovou inicialmente um Programa de Acesso Expandido (EAP) para tratar pacientes com COVID-19 com plasma de indivíduos com um título de neutralização de 1:160 ou superior. Este programa tratou mais de 94.000 pacientes nos Estados Unidos. Em agosto passado, a FDA emitiu uma Autorização de Uso de Emergência (EUA) para permitir o tratamento terapêutico com plasma de pacientes com COVID-19 fora dos ensaios clínicos.

Os investigadores afirmam que este teste não requer interpretação subjetiva e é, portanto, mais preciso do que a maioria dos outros testes para neutralizar vírus de tipo selvagem.

“Embora sempre haja variabilidade nos ensaios de vírus vivos devido à natureza do sistema biológico, o uso de uma abordagem estatística rigorosa para informar a aceitação dos dados pode mitigar os potenciais efeitos negativos da baixa eficiência da infecção, erros de pipetagem, efeitos de borda e manchas de inconsistência.”

Esta notícia foi uma revisão de um relatório científico preliminar que não havia sido revisado por pares no momento da publicação. Desde a sua publicação inicial, o relatório científico foi agora revisto por pares e aceite para publicação numa revista académica. Links para os relatórios preliminares e revisados ​​por pares podem ser encontrados na seção Fontes no final deste artigo.Ver fontes

Revisões de artigos

• 5. April 2023 – Die vorab gedruckte vorläufige Forschungsarbeit, auf der dieser Artikel basiert, wurde zur Veröffentlichung in einer von Experten begutachteten wissenschaftlichen Zeitschrift angenommen. Dieser Artikel wurde entsprechend bearbeitet und enthält nun einen Link zum endgültigen, von Experten begutachteten Artikel, der jetzt im Abschnitt „Quellen“ angezeigt wird.

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