Cercetătorii dezvoltă un test pentru evaluarea calitativă a anticorpilor neutralizanți SARS-CoV-2

Cercetătorii dezvoltă un test pentru evaluarea calitativă a anticorpilor neutralizanți SARS-CoV-2

Testarea extinsă pentru infecția cu coronavirus 2 (SARS-CoV-2) cu sindrom respirator acut sever a fost o măsură principală de izolare pentru a limita pandemia în curs. Infecția provoacă boala coronavirus 2019 (COVID-19), care a provocat până acum peste 2,7 milioane de vieți în întreaga lume. Nevoia de soluții terapeutice eficiente este mare, având în vedere și programele de vaccinare în curs de desfășurare împotriva SARS-CoV-2 în multe părți ale lumii. O astfel de abordare terapeutică pe bază de plasmă este utilizarea anticorpilor neutralizanți din sângele pacienților convalescenți.

Pentru a răspunde nevoii unui test de neutralizare de înaltă calitate împotriva SARS-CoV-2, cercetătorii de la Institutul Național de Alergie și Boli Infecțioase (NIAID) au modificat și optimizat un test de neutralizare a reducerii fluorescenței (FRNA) stabilit anterior pentru a permite evaluarea calitativă a unui număr mare de celule infectate prin utilizarea unui sistem de imagistică cu conținut ridicat.

În acest studiu, echipa a descris un test de neutralizare cu randament semi-înalt, extrem de cantitativ pentru SARS-CoV-2, bazat pe sistemul de imagistică cu conținut ridicat Operetta. Autorii au susținut că dispozitivele similare (care ar putea să nu fie disponibile în multe setări de laborator) ar putea fi la fel de eficiente cu o validare adecvată.

Ei au raportat că, din februarie 2021, SARS-CoV-2 FRNA a fost utilizat pentru a examina peste 5.000 de probe, inclusiv probe de plasmă sau ser acute și convalescente și tratamente terapeutice cu anticorpi, pentru titrurile de neutralizare a SARS-CoV-2.

„Deși va exista întotdeauna o variabilitate în testele virușilor vii datorită naturii sistemului biologic, utilizarea unei abordări statistice riguroase pentru a informa acceptabilitatea datelor poate atenua potențialele efecte negative ale eficienței slabe a infecției, erorile de pipetare, efectele marginilor și colorarea inconsecventă”.

COVID-19 este o boală eterogenă care se manifestă adesea sub formă de boli respiratorii severe, boli cardiovasculare și boli neurologice. În timpul unei boli acute, are loc o schimbare rapidă a clasei de anticorpi de la imunoglobulina M (IgM) la IgG și IgA. Cercetătorii observă că izotipul anticorpului este la fel de important în controlul bolii ca și proteina țintă virală.

Cercetătorii au observat că severitatea bolii este asociată cu răspunsuri de anticorpi mai robuste și de lungă durată la nucleoproteina virală (N). Prin urmare, se crede că prezența anticorpilor anti-SARS-CoV-2 în sânge este o măsură bună a imunității protectoare a unui candidat la vaccin. Acest lucru necesită metode rapide care sunt fiabile și sensibile pentru a detecta anticorpii neutralizanți SARS-CoV-2.

Colorarea prin imunofluorescență a celulelor infectate cu SARS-CoV-2.A. Celulele neinfectate colorate cu colorant nuclear Hoechst (albastru). B. Celule infectate cu SARS-CoV-2 și examinate cu un anticorp specific pentru proteina SARS-CoV N și un anticorp secundar Alexa594 (roșu). Celulele au fost contracolorate cu colorant nuclear Hoechst (albastru).

Acest articol de știri a fost o revizuire a unui raport științific preliminar care nu a fost revizuit de colegi la momentul publicării. De la publicarea sa inițială, raportul științific a fost acum revizuit de colegi și acceptat pentru publicare într-o jurnal academic. Link-uri către rapoartele preliminare și revizuite de colegi pot fi găsite în secțiunea Surse de la sfârșitul acestui articol.Vizualizați sursele

FRNA este un test foarte specific, cuantificabil și riguros pentru evaluarea anticorpilor neutralizanți dintr-o probă de testare. Testul cuantifică celulele individuale infectate cu adăugarea inițială de virus și nu necesită mai multe runde de replicare a virusului.

Ca test atipic, nu se bazează pe determinarea subiectivă a efectelor citopatice celulare și nici pe dezvoltarea plăcilor multicelulare sau a focarelor imune folosind un număr mic de particule infecțioase per godeu. Cercetătorii au examinat controlul virusului și observațiile de control celular pentru valori aberante și au evaluat variabilitatea și specificitatea testului.

Deoarece testul utilizează scheme de diluare în 12 pași și analiză logistică cu patru parametri pentru a cuantifica un anumit NT50, permite o înțelegere mai precisă a capacității de neutralizare, în special în cazul anticorpilor monoclonali sau nanocorpilor.

În acest studiu, cercetătorii au descris dezvoltarea unui test de neutralizare a SARS-CoV-2 cu randament semi-înalt care valorifică capacitățile unui sistem de imagistică cu conținut ridicat pentru a cuantifica numărul de celule infectate în godeuri individuale. Foarte important, cercetătorii au arătat că testul ar putea fi adaptat rapid pentru utilizare cu mai multe variante de virus. Astfel de teste ajută enorm și accelerează studiile preclinice de vaccin și studiile clinice.

În timpul crizei COVID-19, Administrația SUA pentru Alimente și Medicamente (FDA) a aprobat inițial un program de acces extins (EAP) pentru a trata pacienții cu COVID-19 cu plasmă de la indivizi cu un titru de neutralizare de 1:160 sau mai mare. Acest program a tratat peste 94.000 de pacienți din Statele Unite. În august anul trecut, FDA a emis o autorizație de utilizare de urgență (EUA) pentru a permite tratamentul cu plasmă terapeutică a pacienților cu COVID-19 în afara studiilor clinice.

Cercetătorii susțin că acest test nu necesită interpretare subiectivă și, prin urmare, este mai precis decât majoritatea altor teste pentru neutralizarea virușilor de tip sălbatic.

„Deși va exista întotdeauna o variabilitate în testele virușilor vii datorită naturii sistemului biologic, utilizarea unei abordări statistice riguroase pentru a informa acceptarea datelor poate atenua potențialele efecte negative ale eficienței slabe a infecției, erorile de pipetare, efectele marginilor și petele de inconsecvență.”

Acest articol de știri a fost o revizuire a unui raport științific preliminar care nu a fost revizuit de colegi la momentul publicării. De la publicarea sa inițială, raportul științific a fost acum revizuit de colegi și acceptat pentru publicare într-o jurnal academic. Link-uri către rapoartele preliminare și revizuite de colegi pot fi găsite în secțiunea Surse de la sfârșitul acestui articol.Vizualizați sursele

Revizuirile articolului

• 5. April 2023 – Die vorab gedruckte vorläufige Forschungsarbeit, auf der dieser Artikel basiert, wurde zur Veröffentlichung in einer von Experten begutachteten wissenschaftlichen Zeitschrift angenommen. Dieser Artikel wurde entsprechend bearbeitet und enthält nun einen Link zum endgültigen, von Experten begutachteten Artikel, der jetzt im Abschnitt „Quellen“ angezeigt wird.

Surse: