Výskumníci vyvinuli test na kvalitatívne hodnotenie neutralizujúcich protilátok SARS-CoV-2

Výskumníci vyvinuli test na kvalitatívne hodnotenie neutralizujúcich protilátok SARS-CoV-2

Rozsiahle testovanie na infekciu koronavírusom 2 (SARS-CoV-2) závažného akútneho respiračného syndrómu bolo primárnym opatrením na zamedzenie prebiehajúcej pandémie. Infekcia spôsobuje koronavírusové ochorenie 2019 (COVID-19), ktoré si doteraz vyžiadalo viac ako 2,7 milióna životov na celom svete. Potreba účinných terapeutických riešení je veľká aj vzhľadom na prebiehajúce očkovacie programy proti SARS-CoV-2 v mnohých častiach sveta. Jedným z takýchto terapeutických prístupov na báze plazmy je použitie neutralizačných protilátok z krvi pacientov v rekonvalescencii.

Na riešenie potreby vysokokvalitného neutralizačného testu proti SARS-CoV-2 výskumníci z Národného inštitútu pre alergie a infekčné choroby (NIAID) upravili a optimalizovali predtým zavedený test neutralizácie redukcie fluorescencie (FRNA), aby umožnili kvalitatívne hodnotenie veľkého počtu infikovaných buniek pomocou zobrazovacieho systému s vysokým obsahom.

V tejto štúdii tím opísal polovysoko výkonný, vysoko kvantitatívny neutralizačný test pre SARS-CoV-2 založený na zobrazovacom systéme Operetta s vysokým obsahom. Autori tvrdili, že podobné zariadenia (ktoré nemusia byť dostupné v mnohých laboratórnych prostrediach) by mohli byť rovnako účinné s vhodnou validáciou.

Uviedli, že od februára 2021 sa SARS-CoV-2 FRNA používala na skríning viac ako 5 000 vzoriek vrátane akútnych a rekonvalescentných vzoriek plazmy alebo séra a terapeutických protilátok na neutralizačné titre SARS-CoV-2.

"Aj keď v testoch živých vírusov bude vždy existovať variabilita v dôsledku povahy biologického systému, použitie prísneho štatistického prístupu na informovanie o prijateľnosti údajov môže zmierniť potenciálne negatívne účinky slabej účinnosti infekcie, chýb pri pipetovaní, okrajových efektov a nekonzistentného farbenia."

COVID-19 je heterogénne ochorenie, ktoré sa často prejavuje závažnými respiračnými ochoreniami, kardiovaskulárnymi ochoreniami a neurologickými ochoreniami. Počas akútneho ochorenia dochádza k rýchlej zmene triedy protilátok z imunoglobulínu M (IgM) na IgG a IgA. Vedci poznamenávajú, že izotyp protilátky je rovnako dôležitý pri kontrole ochorenia ako vírusový cieľový proteín.

Výskumníci zistili, že závažnosť ochorenia je spojená s robustnejšími a dlhodobejšími protilátkovými odpoveďami na vírusový nukleoproteín (N). Preto sa predpokladá, že prítomnosť protilátok proti SARS-CoV-2 v krvi je dobrým meradlom ochrannej imunity kandidáta na vakcínu. To si vyžaduje rýchle metódy, ktoré sú spoľahlivé a citlivé na detekciu neutralizačných protilátok SARS-CoV-2.

Imunofluorescenčné farbenie buniek infikovaných SARS-CoV-2.A. Neinfikované bunky zafarbené jadrovým farbením Hoechst (modré). B. Bunky infikované SARS-CoV-2 a skúmané protilátkou špecifickou pre proteín SARS-CoV N a sekundárnou protilátkou Alexa594 (červená). Bunky boli kontrastne zafarbené nukleárnym farbivom Hoechst (modré).

Tento spravodajský článok bol recenziou predbežnej vedeckej správy, ktorá nebola v čase uverejnenia recenzovaná. Od svojho počiatočného zverejnenia bola vedecká správa teraz recenzovaná a prijatá na publikovanie v akademickom časopise. Odkazy na predbežné a recenzované správy nájdete v časti Zdroje na konci tohto článku.Zobraziť zdroje

FRNA je vysoko špecifický, kvantifikovateľný a prísny test na hodnotenie neutralizačných protilátok v testovanej vzorke. Test kvantifikuje jednotlivé bunky infikované počiatočným pridaním vírusu a nevyžaduje viac kôl replikácie vírusu.

Ako atypický test sa nespolieha na subjektívne stanovenie bunkových cytopatických účinkov ani na vývoj mnohobunkových plakov alebo imunitných ložísk s použitím malého počtu infekčných častíc na jamku. Výskumníci skúmali pozorovania kontroly vírusov a kontroly buniek na odľahlé hodnoty a hodnotili variabilitu a špecifickosť testu.

Pretože test používa 12-krokové schémy riedenia a štvorparametrovú logistickú analýzu na kvantifikáciu špecifického NT50, umožňuje presnejšie pochopenie neutralizačnej kapacity, najmä v prípade monoklonálnych protilátok alebo nanoprotilátok.

V tejto štúdii výskumníci opísali vývoj polovysokovýkonného neutralizačného testu SARS-CoV-2, ktorý využíva schopnosti zobrazovacieho systému s vysokým obsahom na kvantifikáciu počtu infikovaných buniek v jednotlivých jamkách. Dôležité je, že vedci ukázali, že test možno rýchlo prispôsobiť na použitie s viacerými variantmi vírusov. Takéto testy nesmierne pomáhajú a urýchľujú predklinické štúdie vakcín a klinické testy.

Počas krízy COVID-19 americký Úrad pre kontrolu potravín a liečiv (FDA) pôvodne schválil program rozšíreného prístupu (EAP) na liečbu pacientov s COVID-19 plazmou od jednotlivcov s neutralizačným titrom 1:160 alebo vyšším. Tento program ošetril viac ako 94 000 pacientov v celých Spojených štátoch. Minulý rok v auguste vydala FDA povolenie na núdzové použitie (EUA), ktoré umožňuje terapeutickú plazmatickú liečbu pacientov s COVID-19 mimo klinických skúšok.

Vedci tvrdia, že tento test nevyžaduje subjektívnu interpretáciu, a preto je presnejší ako väčšina iných testov na neutralizáciu vírusov divokého typu.

"Aj keď v testoch živých vírusov bude vždy existovať variabilita v dôsledku povahy biologického systému, použitie prísneho štatistického prístupu na informovanie o akceptácii údajov môže zmierniť potenciálne negatívne účinky slabej účinnosti infekcie, chýb pri pipetovaní, okrajových efektov a nekonzistentných škvŕn."

Tento spravodajský článok bol recenziou predbežnej vedeckej správy, ktorá nebola v čase uverejnenia recenzovaná. Od svojho počiatočného zverejnenia bola vedecká správa teraz recenzovaná a prijatá na publikovanie v akademickom časopise. Odkazy na predbežné a recenzované správy nájdete v časti Zdroje na konci tohto článku.Zobraziť zdroje

Revízie článku

• 5. April 2023 – Die vorab gedruckte vorläufige Forschungsarbeit, auf der dieser Artikel basiert, wurde zur Veröffentlichung in einer von Experten begutachteten wissenschaftlichen Zeitschrift angenommen. Dieser Artikel wurde entsprechend bearbeitet und enthält nun einen Link zum endgültigen, von Experten begutachteten Artikel, der jetzt im Abschnitt „Quellen“ angezeigt wird.

Zdroje: