Raziskovalci razvijajo test za kvalitativno oceno nevtralizirajočih protiteles SARS-CoV-2

Raziskovalci razvijajo test za kvalitativno oceno nevtralizirajočih protiteles SARS-CoV-2

Obsežno testiranje na okužbo s koronavirusom 2 s hudim akutnim respiratornim sindromom (SARS-CoV-2) je bil glavni zajezitveni ukrep za zajezitev sedanje pandemije. Okužba povzroča koronavirusno bolezen 2019 (COVID-19), ki je doslej terjala več kot 2,7 milijona življenj po vsem svetu. Potreba po učinkovitih terapevtskih rešitvah je velika, tudi glede na tekoče programe cepljenja proti SARS-CoV-2 v mnogih delih sveta. Eden takšnih terapevtskih pristopov na osnovi plazme je uporaba nevtralizirajočih protiteles iz krvi rekonvalescentov.

Da bi odgovorili na potrebo po visokokakovostnem nevtralizacijskem testu proti SARS-CoV-2, so raziskovalci na Nacionalnem inštitutu za alergije in nalezljive bolezni (NIAID) spremenili in optimizirali predhodno vzpostavljeni nevtralizacijski test z zmanjšanjem fluorescence (FRNA), da bi omogočili kvalitativno oceno velikega števila okuženih celic z uporabo slikovnega sistema z visoko vsebnostjo.

V tej študiji je ekipa opisala pol-visoko zmogljiv, visoko kvantitativni nevtralizacijski test za SARS-CoV-2, ki temelji na slikovnem sistemu Operetta z visoko vsebnostjo. Avtorji so trdili, da bi lahko bile podobne naprave (ki morda niso na voljo v številnih laboratorijih) enako učinkovite z ustrezno validacijo.

Poročali so, da je bila od februarja 2021 SARS-CoV-2 FRNA uporabljena za presejanje več kot 5000 vzorcev, vključno z akutno in rekonvalescenčno plazmo ali serumskimi vzorci ter terapevtskimi zdravljenji s protitelesi, za nevtralizirajoče titre SARS-CoV-2.

"Medtem ko bo zaradi narave biološkega sistema vedno obstajala variabilnost v testih živega virusa, lahko uporaba strogega statističnega pristopa za informiranje o sprejemljivosti podatkov ublaži morebitne negativne učinke slabe učinkovitosti okužbe, napak pri pipetiranju, robnih učinkov in nedoslednega barvanja."

COVID-19 je heterogena bolezen, ki se pogosto kaže kot hude bolezni dihal, srca in ožilja ter nevrološke bolezni. Med akutno boleznijo pride do hitre spremembe v razredu protiteles iz imunoglobulina M (IgM) v IgG in IgA. Raziskovalci ugotavljajo, da je izotip protitelesa prav tako pomemben pri obvladovanju bolezni kot virusni ciljni protein.

Raziskovalci so ugotovili, da je resnost bolezni povezana z močnejšimi in dolgotrajnejšimi odzivi protiteles na virusni nukleoprotein (N). Zato se domneva, da je prisotnost protiteles proti SARS-CoV-2 v krvi dobro merilo zaščitne imunosti kandidata za cepivo. To zahteva hitre metode, ki so zanesljive in občutljive za odkrivanje nevtralizirajočih protiteles SARS-CoV-2.

Imunofluorescenčno barvanje celic, okuženih s SARS-CoV-2.A. Neokužene celice, obarvane z jedrnim barvilom Hoechst (modro). B. Celice, okužene s SARS-CoV-2 in pregledane s protitelesom, specifičnim za protein SARS-CoV N, in sekundarnim protitelesom Alexa594 (rdeče). Celice so bile kontrastno obarvane z jedrskim barvilom Hoechst (modro).

Ta članek je bil pregled predhodnega znanstvenega poročila, ki v času objave ni bilo strokovno pregledano. Od prve objave je bilo znanstveno poročilo strokovno pregledano in sprejeto za objavo v akademski reviji. Povezave do predhodnih in strokovno pregledanih poročil lahko najdete v razdelku Viri na koncu tega članka.Ogled virov

FRNA je zelo specifičen, merljiv in strog test za ocenjevanje nevtralizirajočih protiteles v testnem vzorcu. Test kvantificira posamezne celice, okužene z začetnim dodatkom virusa, in ne zahteva več krogov replikacije virusa.

Kot atipični test se ne zanaša na subjektivno določanje celičnih citopatskih učinkov niti na razvoj večceličnih plakov ali imunskih žarišč z uporabo majhnega števila infektivnih delcev na jamico. Raziskovalci so preučili opazovanja nadzora virusa in nadzora celic za izstopajoče vrednosti ter ocenili variabilnost in specifičnost testa.

Ker test uporablja 12-stopenjske sheme redčenja in štiriparametrsko logistično analizo za kvantificiranje specifičnega NT50, omogoča natančnejše razumevanje nevtralizacijske sposobnosti, zlasti v primeru monoklonskih protiteles ali nanoteles.

V tej študiji so raziskovalci opisali razvoj pol-visoko zmogljivega nevtralizacijskega testa SARS-CoV-2, ki izkorišča zmogljivosti slikovnega sistema z visoko vsebnostjo za kvantificiranje števila okuženih celic v posameznih vdolbinicah. Pomembno je, da so raziskovalci pokazali, da je mogoče test hitro prilagoditi za uporabo z več različicami virusa. Takšni testi izjemno pomagajo in pospešijo predklinične študije cepiva in klinična preskušanja.

Med krizo COVID-19 je ameriška uprava za hrano in zdravila (FDA) sprva odobrila program razširjenega dostopa (EAP) za zdravljenje bolnikov s COVID-19 s plazmo posameznikov z nevtralizacijskim titrom 1:160 ali višjim. Ta program je zdravil več kot 94.000 bolnikov po vsej ZDA. Avgusta lani je FDA izdala dovoljenje za uporabo v nujnih primerih (EUA), da bi omogočila terapevtsko zdravljenje s plazmo bolnikov s COVID-19 zunaj kliničnih preskušanj.

Raziskovalci trdijo, da ta test ne zahteva subjektivne interpretacije in je zato natančnejši od večine drugih testov za nevtralizacijo divjih tipov virusov.

"Čeprav bodo testi živih virusov zaradi narave biološkega sistema vedno variabilni, lahko uporaba strogega statističnega pristopa za obveščanje o sprejemanju podatkov ublaži potencialne negativne učinke slabe učinkovitosti okužbe, napak pri pipetiranju, robnih učinkov in nedoslednih madežev."

Ta članek je bil pregled predhodnega znanstvenega poročila, ki v času objave ni bilo strokovno pregledano. Od prve objave je bilo znanstveno poročilo strokovno pregledano in sprejeto za objavo v akademski reviji. Povezave do predhodnih in strokovno pregledanih poročil lahko najdete v razdelku Viri na koncu tega članka.Ogled virov

Revizije člankov

• 5. April 2023 – Die vorab gedruckte vorläufige Forschungsarbeit, auf der dieser Artikel basiert, wurde zur Veröffentlichung in einer von Experten begutachteten wissenschaftlichen Zeitschrift angenommen. Dieser Artikel wurde entsprechend bearbeitet und enthält nun einen Link zum endgültigen, von Experten begutachteten Artikel, der jetzt im Abschnitt „Quellen“ angezeigt wird.

Viri: